Chromatografia

Stacionárne fázy pre UHPLC

Raptor - RESTEK

Závady a ich odstranenie

Väčšine problémov u GC a LC prístrojov možno predísť vykonávaním pravidelnej preventívnej údržby. Ak hľadáte príčinu chromatografického problému, vždy postupujte krok za krokom. Nikdy nerobte zmenu viac parametrov naraz, pretože nebudete vedieť, ktorá zo zmien mala vplyv na výsledok chromatografickej analýzy.

Tu si môžete zvoliť oblasť chromatografie, v ktorej hľadáte tipy pre odstránenie závad:

GC troubleshooting

LC troubleshooting

dSPE (QuEChERS)

Produkty Resprep™ QuEChERS

Extrakčné a Clean-Up dSPE skúmavky QuEChERS pre reziduálnu analýzu pesticídov v potravinách

• Rýchla, jednoduchá extrakcia a prečištenie vzorku s použitím dSPE skúmaviek.
• Štvornásobné zvýšenie výkonnosti predúpravy vzorky.
• Štvornásobné zníženie nákladov na predúpravu vzorky.
• Praktické centrifugačné skúmavky s vysokočistými predváženými zmesami adsorbentov.

Metóda QuEChERS ("catchers")- Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe - bola vyvinutá a publikovaná inštitútom US Department of Agriculture Eastern Regional Research Center vo Wyndmooru, PA. (1) Vedeckí pracovníci hľadali jednoduchú, efektívnu a lacnú cestu na extrakciu a prečistenie vzoriek pre reziduálnu analýzu pesticídov s cieľom nahradiť modifikovanú extrakčnú metódu, ktorá je vysoko účinná a robustná, ale aj náročná na vybavenie laboratória a teda aj drahá. Extrakcia na tuhú fázu (SPE) je tiež účinná metóda, ale v prípade komplexných matríc je nutné použiť viac jednotlivých kolónok s rôznymi sorbentami pre odstránenie mnohých skupín interferujúcich látok. Nová metóda QuEChERS odstraňuje sacharidy, lipidy, organické kyseliny, steroly, proteíny, farbivá a vodu. Je jednoduchá a lacná.

Tím vedcov vyvinul jednoduchú metódu, skladajúcu sa z dvoch krokov. Prvý krok procedúry je extrakcia homogenizovanej vzorky a frakcionácie pomocou organického rozpúšťadla a roztokov solí. Druhý krok je extrakcia a prečistenie organickej vrstvy s pomocou disperzívnej SPE techniky. K zmesi adsorbentov je pridaný 1 ml organického rozpúšťadla z kroku 1, obsah je dôkladne premiešaný a scentrifugovaný. Teraz je pripravený čistý extrakt pre analýzu rôznymi GC a HPLC technikami. (2) Validačné dáta metódy QuEChERS sú k dispozícii pre širokú škálu pesticídov v niekoľkých bežných potravinách na www.quechers.com.

Použitá disperzívna SPE metóda, množstvo a typy adsorbentov, pH alebo polarita rozpúšťadiel môže byť jednoducho optimalizovaná pre rôzne matrice a analyty. Výsledky tohto postupu sú overované a kvalifikované niekoľkými USDA (US Dep. Of Agriculture) a administratívnymi potravinárskymi laboratóriami a sú tak plne akceptované pre mnoho matríc reziduálnych analýz pesticídov.

Produkty Resprep ™ ešte viac tento postup zjednodušujú. Cetrifugačné skúmavky, dostupné v rozmeroch 2 a 15 ml, obsahujú síran horečnatý (odstránenie vody z organickej frakcie) a PSA * adsorbent (odstránenie sacharidov a mastných kyselín), ďalej môžu byť s prídavkom grafitizovaného uhlíka (odstránenie pigmentov a sterolov) alebo adsorbenta C18 ( odstránenie nepolárnych interferujúcich látok).

Ak ste nespokojní s časom a výškou finančných nákladov vynaložených na predprípravu vzoriek pre reziduálne analýzy pesticídov, vyskúšajte túto novú jednoduchú a ekonomickú metódu.

Viac informácií o jednotlivých produktoch nájdete tu.

Referencie:

1. Anastassiades, M., S.J. Lehotay, D. Stajnbaher, F.J. Schenck, Fast and Easy Multiresidue Method Employing Acetonitrile Extraction/Partitioning and "Dispersive Solid-Phase Extraction" for the Determination of Pesticide Residues in Produce, J AOAC International, 2003, vol 86 no 22, pp 412-431.
2. Schenck, F.J., SPE Cleanup and the Analysis of PPB Levels of Pesticides in Fruits and Vegetables. Florida Pesticide Residue Workshop, 2002

Fázy MEPS

Ihly BIN sa dodávajú s rôznymi SPE fázami. Rozmery lóže sorbentov zaisťujú, že separačná schopnosť sorbentu je identická s konvenčnou SPE. Príprava vzoriek komplexných biologických matríc je pomocou MEPS jednoduchá a znižuje nároky na objem vzorky a používaných reagencií v porovnaní s SPE nebo inými „mikroextrakčnými technikami“. MEPS využíva separáciu pomocou reverznej fázy, normálnej fázy, zmesného módu a iónovej výmeny. Keďže MEPS umožňuje prácu s malými objemami (až 10µL), je vhodnou technikou pre priame prepojenie s LC-MS systémami. Súčasný rozsah striekačiek umožňuje ručné použitie alebo využitie automatických dávkovačov Thermo Scientific, CTC Analytics, HTA 300APlus a Varian 8400 bez nutnosti ich úpravy. Ihly BIN sú v prevedení pre LC a GC aplikácie. Ihly sú balené v utesnených fóliách po 5 kusoch.

SGE

*C8+SCX ihly BIN sú označené ako M1.

Ihly BIN je možné spravidla použiť pre 40 - 100 extrakcií. Obvyklá doba prípravy vzorky je 1 - 2 minúty.

Stacionárne fázy

GC, HPLC, SPE, FLASH- alebo preparatívna chromatografia používa široký rad stacionárnych fáz. Na týchto stránkach nájdete bližšie informácie o jednotlivých typoch.

Stacionárna fáze pre analytické separácie

• Technológie s pevným jadrom a poréznym povrchom
• GC
• HPLC
• UHPLC

Stacionárne fázy pre prípravu vzorkiek

• SPE
• dSPE (QuEChERS)
• IAC (imunoafinitné kolónky)
• MEPS (mikroextrakcia na pevné fázy)
• FLASH
• BULK (média pre preparatívnu chromatografiu)

Slovník pojmov

• BEH = "Bridged ethylen hybrid" (HPLC častice s vyššou odolnosťou pH)
• DAC = "dynamic axial compression"
• DAD = "diod array detector"
• ECD = detektor elektrónového záchytu
• EI = elektrónová ionizácia
• ELSD = "evaporative light scattering detector"
• FIA = "flow injection analysis"
• FID = plameňovo ionizačný detektor
• FPD = plameňovo fotometrický detektor
• GC = plynová chromatografia
• GCTQ = plynový chromatograf s trojnásobným kvadrupólom
• GCxGC = multidimenzionálna plynová chromatografia
• GPC = gélová permeačná chromatografia
• HETP = výškový ekvivalent teoretického poschodia
• HID = héliový detektor
• HILIC = kvapalinová chromatografia s hydrofóbnymi interakciami
• HPLC = vysokoúčinná kvapalinová chromatografia
• HPTLC = vysokoúčinná tenkovrstvová chromatografia
• IC = iónová chromatografia
• IHPLC = vysokoúčinná kvapalinová chromatografia pre stredné tlaky
• LVI = nástrek veľkého objemu vzorku
• MCSGP = Multicolumn countercurrent solvent gradient purification (kontinuálna chromatografia)
• MEPS = mikroextrakcia na pevnej fáze
• MLC = micelárna kvapalinová chromatografia
• MS = hmotnostná spektrometria
• MSPE = Micro SPE
• NP = normálna fáza
• NQAD = Nano Quantity Analyte Detector
• ODS = oktadecyl silikagél
• PDD = pulzný výbojový detektor
• PFPD = pulzný plameňovo fotometrický detektor
• PID = fotoionizačný detektor
• PTV = injektor s programovateľnou teplotou
• RI = refraktívny index
• RP = reverzná fáza
• RRLC = "rapid resolution liquid chromatography"
• SBSE = "stirring bar sorbent extraction"
• SEC = "size exclusion chromatography"
• SFC = supercritical fluid chromatography
• SIM = "single ion monitoring"
• SMB =" simulated moving bed"
• SPE = extrakcia na pevnej fáze
• SPME = "solid-phase microextraction"
• SPP = častice s pevným jadrom (core-shell)
• TCD = teplotne vodivostný detektor
• TIC = celkový iónový prúd
• TLC = tenkovrstvová chromatografia
• TOF = MS preletový analyzátor ("Time of Flight")
• UFLC = "ultra fast liquid chromatography"
• UPLC = "ultra performance liquid chromatography"
• UHPLC = "ultra high pressure liquid chromatography", "ultra high performance liquid chromatography"

Zvýšenie pomeru signál/šum v plynovej chromatografii

Dnešné potreby laboratórií sú:

• nižšia medza detekcie a kvantifikácie (LOD, LQD)
• zvýšenie stability GC a GC/MS systémov
• vyššia inertnosť a stabilita GC komponent (kolóny, septá, vialky, linery, ...)

Nižšiu medzu detekcie a kvantifikácie je možné dosiahnuť:

• znížením šumu
• zvýšením signálu

Kovové ferulky SilTite pro GC a GC/MS

Ferulky SilTite sú unikátne kovové ferulky dizajnované pre spojenie kremenných kapilárnych GC kolón a kapilár s hmotnostnými spektrometrami a GC injektormi. Už po prvom správnom utiahnutí poskytujú ferulky SilTite tesné spojenie aj po mnohých teplotných cykloch bez nutnosti ďalšieho doťahovania. Ferulky SilTite sa používajú v spojení s maticami a fitinkami SGE SilTite s katalógovými číslami:

• SGE*073200
• SGE*073201
• SGE*073202
• SGE*073203

Prečo zvoliť ferulky SilTite?

• eliminácia netesností (pozri obrázky nižšie)
• nie je nutné ďalšie doťahovanie, a to dokonca ani po viacerých teplotných cykloch
• ferulky zostávajú trvale fixované na kolóne a nepriľnú k matici
• žiadna kontaminácia z materiálu Vespel alebo grafit - 100% kov
• ideálne pro vysokotlakové aplikácie (fast GC)
• vhodné pro pripojenie k injektorom
• maximálna teplota >500°C

Obr. 1 Stopy vzduchu v MS systéme po 5 teplotných cykloch pri použití feruliek Vespel/grafit.

Obr. 2 MS spektrum po 5 teplotných cykloch pri použití feruliek Siltite. (pri MS, nie sú prítomné netesnosti dokonca aj po 400 teplotných cykloch 70ºC a 400ºC).

Vylepšenie tesnenia u injektorov GC Agilent

Tesnenie injektora GC Agilent, ktoré nevyžaduje podložku má výrazne vyššiu tesnosť ako originálny diel výrobcu a je s ním oveľa jednoduchšia manipulácia.

• zabraňuje permeácii kyslíka do nosného plynu a tým predlžuje životnosť kolóny
• o-krúžok (Vespel^®) na okraji disku výrazne uľahčuje uťahovanie a nevyžaduje použitie veľkej sily
• o-krúžok (Vespel^®) na spodnej časti disku eliminuje nutnosť použitia podložky (jednoduchšia inštalácia).

Split/splitless injektor v plynových chromatografoch Agilent obsahuje v spodnej časti kovové tesnenie, ktoré sa ťažko vymieňa a nevykazuje dokonalú tesnosť (spojenie kov-kov). Aj pri dotiahnutí veľkou silou vykazuje spojenie kov-kov pomerne veľké netesnosti, obzvlášť potom, ak sa tesnenie použije opakovane. To má za následok prenikanie atmosférického kyslíka do nosného plynu a pozvoľnú degradáciu stacionárnej fázy inštalovanej GC kolóny.

Porovnanie tesnosti originálneho tesnenia Agilent s tesnením Restek

Patentované tesnenie Dual Vespel^® Ring Inlet Seal (Restek) výrazne zvyšuje tesnosť injektora aj po opakovaných teplotných cykloch bez nutnosti opätovného doťahovanie matice. Tesnenie zabezpečujú dva o-krúžky z materiálu Vespel^® - jeden je umiestnený na hornej strane disku, druhý na jeho spodnej časti. Tieto o-krúžky eliminujú nutnosť použitia podložky a uľahčujú doťahovanie matice, ktorá disk drží (je nutná veľká sila pre jej dotiahnutie). Testy tesnosti na únik hélia preukázali dokonalú tesnosť aj pri ľahkom dotiahnutí tesnenia.

Varianty tesnenia

• nerezové
• pozlátené
• s deaktiváciou Siltek

Výber vhodného septa pro GC

GC Agilent

GC DANI

GC Perkin-Elmer

GC Shimadzu

GC Varian

GC Thermo Scientific