Chromatografia

MetAmino FAQ

Aký je typ membrány vo vnútri spin filtra?

• Membrána je vyrobená z materiálu NYLON a jej porozita je 0,22 µm. Jej priemer je optimalizovaný na použitie s daným spin filtrom.

Je možné rozšíriť MetAmino ^® kit o ďalšie analyty?

• Áno, MetAmino ^® kit je možné ďalej rozširovať. Kontaktujte nás s detailnými informáciami.

Môžem použiť MetAmino ^® kit na analýzu moču?

• Áno, MetAmino ^® kit možno použiť na analýzu moču. Vzorka nesmie obsahovať bielkoviny, takže pred použitím kitu musí byť upravený bežným spôsobom (odstreďovanie, filtrácia).

Môžeme objednať reagencie samostatne?

• Áno, celú súpravu reagencií je možné objednať pod katalógovým číslom MAK-5857-L002 .

Aký je tlak v priebehu LC/MS analýzy?

• Na začiatku analýzy je tlak 380 barov, na konci je 200 barov.

Sú MRM pre aminokyseliny uvedené v MetAmino ^® kitu vytvorené po derivatizácii štandardov alebo pred ňou?

• Prechody MRM pre AA uvedené v návode sú uvedené ako prechody derivátov AA a nie natívnych AA.

Mala by byť vzorka krmiva pred prácou so súpravou MetAmino ^® kitu hydrolyzovaná?

• Precipitácia pomocou precipitačného média (PM) nie je nevyhnutným krokom pre úspešnú derivatizáciu vzorky. Kit bol testovaný predovšetkým na analýzu biofluidov, ktoré často obsahujú peptidy. Aby sa zabránilo ich zrážaniu počas derivatizácie, bol krok zrážania zahrnutý do protokolu prípravy vzorky.
• Pokiaľ je vyžadovaná celková analýza voľných a na peptid viazaných aminokyselín, v tomto prípade by sme odporučili vzorku hydrolyzovať a potom alikvot hydrolyzovanej vzorky vysušiť pod prúdom dusíka alebo v speedvacu. Vysušený zvyšok rozpustite v 25 µl deionizovanej vody alebo 0,1M vodnej HCl (pre lepšiu rozpustnosť) a postupujte podľa návodu pridaním 10 µl roztoku IS.
• Pokiaľ ide o hydrolýzu peptidov, používané aditíva (fenol, tiodiglykol) v hydrolyzačnom médiu by tiež mohli byť derivatizované (pravdepodobne nebudú vidieť vo " full scan "). Preto ako hydrolyzačné médium odporúčame 6M HCl.

Môžeme si objednať MetAmino ^® GC/MS kit na prípravu 400 vzoriek?

• Zatiaľ nie, v súčasnej dobe máme iba MetAmino ^® GC/MS kit na prípravu 100 vzoriek. Túto súpravu je možné objednať pod katalógovým číslom MAK-5857-BA01.

V tabuľke je 78 aminokyselín, z ktorých niektoré nie sú v dostupných mixoch štandardov – máme sa teda spoliehať na MRM prechody a pozerať sa na retenčný čas alebo sú to štandardy, ktoré by sme si mali kúpiť, ak ich chceme určovať?

• Na účely kvantifikácie obsahuje sada MetAmino - jedna fľaštička štandardného roztoku SD1 obsiahnutého v sade obsahuje 33 aminokyselín: AAA, ABA, ALA, APA, ARG, ASP, BAIBA, CC, CIT, CTH, GABA, GLU, GLY, GPR, HIS, HLY , HYP, ILE, LEU, LYS, MET, 1MHIS, 3MHIS, ORN, PHE, PHP, PRO, SAR, SER, THR, TPR, TYR, VAL a fľaštička SD2 s lyofilizovanou zmesou 3 aminokyselín: ASN, GLN, TRP. Sada aminokyselín však môže byť ďalej rozšírená na ďalšie zlúčeniny obsahujúce primárne alebo sekundárne amino funkčné skupiny.
• Hmotnosti (m/z) uvedené v príručke sú správne a predstavujú ióny M+H+. Hmotnosti (m/z) a retenčné časy z manuálu boli získané z prístroja LTQ s lineárnou iónovou pascou, avšak dáta z Certifikátu analýzy boli získané z prístroja Q Exactive plus HRMS. V oboch prípadoch bola použitá rovnaká kolóna, prietok a zloženie mobilnej fázy. Retenčné časy (RT) sú experimentálne hodnoty a nezrovnalosti, najmä u zlúčenín s neskorou elúciou, by boli spôsobené použitím rôznych LC/MS prístrojov.

Inštalácia kapilárnych GC kolón

Stručný postup pri inštalácii kapilárnych GC kolón

• Vychlaďte všetky vyhrievané zóny GC
• Skontrolujte čističe plynov a v prípade potreby ich vymeňte
• Vyčistite injektor a detektor
• Vymeňte liner v injektore/detektore za nový
• Vymeňte dôležité tesnenia v injektore a detektore
• Vymeňte septum v injektore
• Nastavte prietok detektorových plynov
• Dôkladne skontrolujte kolónu, či nie je poškodená
• Nasaďte na každom konci kolóny maticu a ferulku
• Odrežte 10 centimetrov z každého konca kolóny. Na rezanie kremenných kolón použite zafírový nôž alebo keramickú doštičku. Na rezanie kovových kolón použite keramickú doštičku alebo hranatý pilník. Nástroje na rezanie kolón nájdete v našom katalógu.
• Zaveste kapilárnu kolónu na držiaky v termostate GC, aby nedošlo k jej poškodeniu
• Vložte požadovaný koniec kolóny do injektora. Správnou dĺžku nájdete v návode na obsluhu daného GC.
• Kolónu nainštalujte tak, aby sa nedotýkala stien termostatu
• Nastavte prietok kolónou v súlade s parametrami uvedenými v testovacom chromatograme výrobcu
• Nastavte splitový pomer, oplach septa a ďalšie parametre v súlade s požiadavkami výrobcu GC
• Uistite sa, že kolónou preteká nosný plyn. Ponorte voľný koniec kolóny do vialky s rozpúšťadlom (acetón alebo izopropanol).
• Vložte požadovaný koniec kolóny do detektora. Správnu dĺžku nájdete v návode na obsluhu daného GC.
• Skontrolujte tesnosť kolóny tepelno-vodivostným detektorom. Nepoužívajte mydlovú vodu alebo kvapalné detektory netesností, pretože môže dôjsť k poškodeniu kolóny.
• Nastavte teplotu injektora a detektora. Detektor zapnite po jeho stabilizácii. Upozornenie - dbajte na to, aby ste neprekročili maximálnu povolenou teplotu kolóny!
• Teraz nastavte správny mŕtvy objem (lineárnu rýchlosť) nastreknutím metánu alebo inej zlúčeniny, ktorá nie je kolónou zadržiavaná.
• Skontrolujte tvar píku, ktorý by mal byť symetrický
• Skondicionujte kolónu pri maximálnej teplote, až sa stabilizuje základná línia detektora (v testovacom chromatogramu kolóny nájdete maximálnu použitú teplotu).
• Nastavte teplotu termostatu a znovu nastreknite metán alebo inú, zlúčeninu, ktorá nie je kolónou zadržiavaná. Upravte podmienky pre optimálnu lineárnu rýchlosť.
• Nastreknite duplicitne testovaciu zmes kolóny a zistite, v akom stave sa nachádza kolóna a celý chromatografický systém
• Nakalibrujte prístroj a teraz môžete nastrekovať vzorky

Poznámka: Ak je kolóna nová, musíte previesť jej kondicionovanie skôr, ako budete nastavovať optimálny mŕtvy čas.

Kondicionování GC kolon

Kondicionování chromatografických kolon za zvýšené teploty bez průtoku nosného plynu trvale poškodí kolonu. V případě netěsnosti dojde k průniku kyslíku do kolony a při kondicionování za vyšší teploty dojde k jejímu trvalému poškození. Proto před započetím kondicionování:

• zkontrolujte správné nastavení prltoku kolonou
• proveďte kontrolu těstnosti abyste se vyvarovali přítomnosti kyslíku v chromatografickém systému

Kondicionování GC kolony:

• nainstalujte kolonu do injektoru. Kolonu nepřipojujte k detektoru (její konec nechte zajištěný uvnitř termostatu.
• nastavte počáteční teplotu termostatu GC na 40°C
• držte tuto teplotu po dobu 15
• nastavte teplotní gradient na 10°C/min
• nastavte maximální teplotu o 20°C nad maximální hodnotu teplotního programu, se kterým budete pracovat (maximální teplota musí být o 25°C nižší než je maximální povolená teplota GC kolony)*
• ponechejte kolonu při vysoké teplotě přes noc a dokud se nestabilizuje základní linie detektoru. Je-li kolona před-kondicionovaná, ponechejte ji na maximální teplotě po dobu 2 hodin a dokud se nestabilizuje základní linie detektoru.

^*Poznámka: Kondicionování přes noc není nutné u před-kondicionovaných kolon. Pečlivě si prostudujte návod dodávaný s kolonou, který má přednost před obecnými doporučeními uvedenými výše.

EasyFlash kolóny

Chromservis uviedol na trh nové kolóny EasyFlash pre vysoko účinnú flash chromatografiu. V tomto článku sa dozviete o výhodách flash chromatografia.

HPLC pripojenia (TN #539)

Táto technická poznámka ukazuje možné typy spojenia medzi stĺpom a LC systémom. Zlé pripojenie môže ovplyvniť oddelenie špičiek a je potrebné sa mu vyhnúť. Správne pripojenie je uvedené nižšie .

Ako pracuje trojitý kvadrupól?

Princíp trojnásobného kvadrupólu (TO) je vysvetlený na systéme EVOQ™ firmy Bruker. Kľúčové prvky systému sú tu:

• Axiálny iónový zdroj
• Aktívne zaostrenie iónov v Q1
• Iónová dráha bez iónovej optiky
• Kolízna cela s geometriou 180 °
• Eliptický dizajn
• Detektor umiestnený mimo os Q3

puriFlash

Flash kolóny puriFlash^®

Interchim vyvinul novú techniku pre chromatografiu - Ultra Performance Flash Purification (UPFP), ktorá využíva špeciálne flash kolónky, ktoré majú pravidelný alebo nepravidelný silikagél. UPFP umožňuje purifikovať zlúčeniny pri získaní vysokej čistoty výťažku a s menšou spotrebou rozpúšťadiel.

Preparatívne LC

Úlohy preparatívnych a analytických HPLC systémov sa od seba líšia. Zatiaľ čo úlohou analytickej HPLC je kvalitatívne a kvantitatívne stanovenie definovaných zlúčenín vo vzorkách, úlohou preparatívnej HPLC je separácia, vyčistenie a izolácia cenných produktov zo zmesí.

Preparatívnu chromatografiu je možné rozdeliť do troch základných oblastí:

• Flash chromatografia
• Semi-preparatívne separácia
• Vsádková preparatívna chromatografia (poloprevádzková alebo výrobná)
• "True Counter-current chromatography"
• " Simulated moving bed " (SMB)
• Kontinuálna chromatografia

Definícia rozsahu

Preparatívnu chromatografiu je možné kombnovať s Flash chromatografiou v jednom systéme - purifikačný chromatograf. Systém PuriFlash (Advion-Interchim) ponúka rôzne prevádzkové režimy:

• Preparative mód + Flash mód
• Dva Flash módy
• Dva preparatívne módy

Úvod

Aminokyseliny sú kľúčovými stavebnými kameňmi života a zohrajú dôležitú úlohu v rôznych metabolických dráhach. Väčšinou pôsobia ako medziprodukty, ktoré často priamo nezahŕňajú proteíny. Vzhľadom na ich chemickú zložitosť a dynamickú povahu je ich spoľahlivá kvantitatívna a kvalitatívna analýza v biologických tekutinách a tkanivách kľúčová pre nutričné informácie, identifikáciu zlúčenín a diagnostiku.

Na tento účel bola vyvinutá jednoduchá, elegantná a doteraz najrýchlejšia metóda na analýzu aminokyselín. Kit MetAmino^® na báze LC/GC-MS ponúka komplexné riešenie pre 75 metabolitov vrátane základných proteinogénnych aminokyselín, biogénnych amínov a koenzýmov s možnosťou ďalšieho rozšírenia analytov.

Vlastnosti

• V zásade vhodný pre akékoľvek matrice (moč, krvné sérum, slzy, mozgová tekutina, tkanivové extrakty, pôdne extrakty atď.)
• Jednoduchá príprava vzorky
• Derivatizácia a analýza vzorky do 20 minút
• Široké portfólio analytov (75) s možnosťou ďalšieho rozšírenia
• Nie je potrebné zahrievanie/zmrazovanie vzorky
• Knižnica NIST pre GC/MS je k dispozícii
• Možnosť analyzovať látky s nízkou molekulovou hmotnosťou, ktoré môžu byť degradované v iónovom zdroji (napr. GLY, ALA atď.)
• Vhodné na analýzu látok, ktoré sa ťažko kvantifikujú, ako sú polyamíny
• Súčasťou sú všetky potrebné chemikálie, príslušenstvo, HPLC kolóna a návod na derivatizáciu a analýzu s vysokou presnosťou a citlivosťou