MetAmino FAQ

Aký je typ membrány vo vnútri spin filtra?

• Membrána je vyrobená z materiálu NYLON a jej porozita je 0,22 µm. Jej priemer je optimalizovaný na použitie s daným spin filtrom.

Je možné rozšíriť MetAmino ^® kit o ďalšie analyty?

• Áno, MetAmino ^® kit je možné ďalej rozširovať. Kontaktujte nás s detailnými informáciami.

Môžem použiť MetAmino ^® kit na analýzu moču?

• Áno, MetAmino ^® kit možno použiť na analýzu moču. Vzorka nesmie obsahovať bielkoviny, takže pred použitím kitu musí byť upravený bežným spôsobom (odstreďovanie, filtrácia).

Môžeme objednať reagencie samostatne?

• Áno, celú súpravu reagencií je možné objednať pod katalógovým číslom MAK-5857-L002 .

Aký je tlak v priebehu LC/MS analýzy?

• Na začiatku analýzy je tlak 380 barov, na konci je 200 barov.

Sú MRM pre aminokyseliny uvedené v MetAmino ^® kitu vytvorené po derivatizácii štandardov alebo pred ňou?

• Prechody MRM pre AA uvedené v návode sú uvedené ako prechody derivátov AA a nie natívnych AA.

Mala by byť vzorka krmiva pred prácou so súpravou MetAmino ^® kitu hydrolyzovaná?

• Precipitácia pomocou precipitačného média (PM) nie je nevyhnutným krokom pre úspešnú derivatizáciu vzorky. Kit bol testovaný predovšetkým na analýzu biofluidov, ktoré často obsahujú peptidy. Aby sa zabránilo ich zrážaniu počas derivatizácie, bol krok zrážania zahrnutý do protokolu prípravy vzorky.
• Pokiaľ je vyžadovaná celková analýza voľných a na peptid viazaných aminokyselín, v tomto prípade by sme odporučili vzorku hydrolyzovať a potom alikvot hydrolyzovanej vzorky vysušiť pod prúdom dusíka alebo v speedvacu. Vysušený zvyšok rozpustite v 25 µl deionizovanej vody alebo 0,1M vodnej HCl (pre lepšiu rozpustnosť) a postupujte podľa návodu pridaním 10 µl roztoku IS.
• Pokiaľ ide o hydrolýzu peptidov, používané aditíva (fenol, tiodiglykol) v hydrolyzačnom médiu by tiež mohli byť derivatizované (pravdepodobne nebudú vidieť vo " full scan "). Preto ako hydrolyzačné médium odporúčame 6M HCl.

Môžeme si objednať MetAmino ^® GC/MS kit na prípravu 400 vzoriek?

• Zatiaľ nie, v súčasnej dobe máme iba MetAmino ^® GC/MS kit na prípravu 100 vzoriek. Túto súpravu je možné objednať pod katalógovým číslom MAK-5857-BA01.

V tabuľke je 78 aminokyselín, z ktorých niektoré nie sú v dostupných mixoch štandardov – máme sa teda spoliehať na MRM prechody a pozerať sa na retenčný čas alebo sú to štandardy, ktoré by sme si mali kúpiť, ak ich chceme určovať?

• Na účely kvantifikácie obsahuje sada MetAmino - jedna fľaštička štandardného roztoku SD1 obsiahnutého v sade obsahuje 33 aminokyselín: AAA, ABA, ALA, APA, ARG, ASP, BAIBA, CC, CIT, CTH, GABA, GLU, GLY, GPR, HIS, HLY , HYP, ILE, LEU, LYS, MET, 1MHIS, 3MHIS, ORN, PHE, PHP, PRO, SAR, SER, THR, TPR, TYR, VAL a fľaštička SD2 s lyofilizovanou zmesou 3 aminokyselín: ASN, GLN, TRP. Sada aminokyselín však môže byť ďalej rozšírená na ďalšie zlúčeniny obsahujúce primárne alebo sekundárne amino funkčné skupiny.
• Hmotnosti (m/z) uvedené v príručke sú správne a predstavujú ióny M+H+. Hmotnosti (m/z) a retenčné časy z manuálu boli získané z prístroja LTQ s lineárnou iónovou pascou, avšak dáta z Certifikátu analýzy boli získané z prístroja Q Exactive plus HRMS. V oboch prípadoch bola použitá rovnaká kolóna, prietok a zloženie mobilnej fázy. Retenčné časy (RT) sú experimentálne hodnoty a nezrovnalosti, najmä u zlúčenín s neskorou elúciou, by boli spôsobené použitím rôznych LC/MS prístrojov.