Príprava vzoriek

Nižšie je uvedený stručný postup prípravy vzorky. Podrobný postup nájdete v užívateľskej príručke MetAmino^® .

Príprava vzorky pre LC-MS analýzu prebieha nasledovne:

1. Napipetujte 100 μl vašej vzorky (sérum, plazma, ...) do centrifugačnej skúmavky a pridajte 100 μL precipitačného média. Centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
2. Napipetujte 25 μl vašej vyzrážanej vzorky do novej centrifugačnej skúmavky a pridajte 10 μl roztoku s vnútornými štandardmi.
3. Napipetujte 20 μl katalytického roztoku a 5-10 sekúnd vortexujte.
4. Napipetujte 10 μl reagenčného (derivatizačného) činidla a vortexujte 5-10 sekúnd. Nechajte derivatizáciu prebiehať aspoň 2-3 minúty.
5. Aktivujte a ekvilibrujte sorbent v MSPE filtri pridaním:
   1. 200 μl aktivačného média sorbentu MSPE, potom centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
   2. 200 μl ekvilibračného média sorbentu MSPE, potom centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
6. Vylejte eluát prešlý membránou.
7. Derivatizačnú reakčnú zmes zrieďte 400 μl riediaceho a premývacieho média a vortexujte 5-10 sekúnd.
8. Zriedenú reakčnú zmes (typicky 450-500 μl) naneste na aktivovaný a naekvilibrovaný MSPE filter a nechajte 1-2 minúty stáť. Centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
9. Vylejte eluát prešlý membránou.
10. Premyte sorbent v MSPE filtri 200 μl zrieďovacieho a premývacieho média a centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
11. Umiestnite MSPE filter do novej centrifugačnej skúmavky, pridajte 200 μl elučného média a centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
12. Preneste eluát do novej vialky a umiestnite ju do autosamplera. Vzorka je pripravená pre LC-MS analýzu.

Príprava vzorky pre GC-MS analýzu prebieha nasledovne:

1. Do reakčnej sklenenej skúmavky napipetujte 25 μl vzorky a 10 μl roztoku s vnútornými štandardmi.
2. Do reakčnej sklenenej skúmavky napipetujte 20 μl redukčného činidla a krátko, 5 až 10 sekúnd, vortexujte. Nechajte 1 až 2 minúty pôsobiť.
3. Do reakčnej sklenenej skúmavky napipetujte 25 μl základného roztoku.
4. Potom pridajte 50 μl reagenčného (derivatizačného) činidla a vortexujte 5 až 10 sekúnd.
5. Napipetujte 25 μl katalytického roztoku do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte.
6. Znovu napipetujte 25 μl katalytického roztoku do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte. Nechajte 1-2 minúty odstáť. Emulzia sa postupne rozdelí na dve vrstvy.
7. Napipetujte 50 μl extrakčného média do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte.
8. Napipetujte 25 μl kyslého média do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte. Potom centrifugujte 30 až 60 sekúnd 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
9. Preneste organickú (hornú) vrstvu (50-100 µL) do autosamplerovej vialky s inzertom. Vzorka je pripravená na analýzu GC-MS.