Chromatografia

Povolené úpravy metód HPLC

Rozsah, v akom je možné upraviť rôzne parametre chromatografického testu bez zásadnej úpravy liekopisných analytických postupov, je uvedený v tejto technickej poznámke. Iné zmeny, ako sú uvedené, vyžadujú predĺženie platnosti postupu.

Dávkovanie vzorky vo Flash chromatografii

Kvapalné alebo pevné vzorky s malým alebo veľkým objemom - pretože sú vaše vzorky rozmanité, ponúkame niekoľko možností dávkovania na kolónu, aby sme zaručili čo najlepšie výsledky.

"Dry load"

K dispozícii sú jednorazové plastové vyrianty "Dry load" koloniek alebo kolónky vo verzii z nerezovej ocele. Tie sú opakovane použiteľné a majú tiež výhodu väčšej odolnosti voči vyššiemu tlaku.
S nerezovou kolónkou "Dry load" môžete vykonávať nástreky pevných látok na preparatívnu kolónu alebo na flash kolónky, kde by maximálna tlaková odolnosť plastovej kolnonky bola nedostatočná.

Dávkovacie slučky

Náš rad dávkovacích slučiek ponúka objemy od 100 μL do 50 mL, takže vyhovieme všetkým vašim potrebám.

Autosampler

Automatizujte dávkovanie vzorky pomocou nášho autosamplera a zvýšte svoj výkon desaťnásobne. PuriFlash ^® AS-1 umožňuje dávkovanie vzoriek od 50 µL do 500 mL s automatickým čistením používaných skúmaviek medzi každým nástrekom.

Dávkovanie vzorky zaisťuje sekvencia softvéru InterSoft . Autosampler môže byť vybavený 6-cestným alebo 10-cestným elektrickým ventilom.

Platforma autosamplera má možnosti použitia stojanu pre skúmavky alebo fľaše až do objemu 250 mL, prípadne použitie stojanov na mieru.

Dávkovacie čerpadlo

Ak máte veľké objemy vzorky, ktoré potrebujete dávkovať na Flash alebo preparatívnu kolónu, stačí použiť naše čerpadlo a potom spustiť metódu. Je to také ľahké!

Stacionárne fáza pre HPLC

ASTRA - CHROMSERVIS

ARION - Chromservis

Na týchto stránkach nájdete aj návod, ako sa starať o (U) HPLC kolóny Arion.

CHROMSHELL - Chromservis

KINETEX - PHENOMENEX

* Kolóny majú stabilitu v rozsahu pH 1.5 až 10 za isokratických podmienok. Pri gradientných elúcie je ich stabilita v rozsahu pH 1.5 až 8.5.

Kolóny Kinetex 2.6μm s ID 2.1mm sú stabilné do tlaku 1000 bar, inak do 600 bar.

Vyskúšajte kolóny ChromShell , ktorými kolóny Kinetex môžete nahradiť.

LUNA - PHENOMENEX

GEMINI - PHENOMENEX

Synergy - PHENOMENEX

ONYX - PHENOMENEX

JUPITER - PHENOMENEX

GraceSmart - GRACE

Alltech ^® Prevail - GRACE

Kapilárnej / Nano LC kolóny ProteCol - SGE

AKO SPRÁVNE UZATVÁRAŤ KRIMPOVACIE VIALKY

Krimpovacie vialky sú výbornou vzorkovnicou pre automatické dávkovače plynových a kvapalinových chromatografov a pre skladovanie vzoriek alebo kalibračných roztokov. Technika ich uzatvárania je veľmi dôležitá pre správnu tesnosť. Vďaka netesnosti spôsobenej nesprávnym uzavretím, môže dôjsť k odpareniu rozpúšťadla alebo k strate analytov.
Správne uzavretá vialka sa pozná podľa toho, že sa jej viečko po uzavretí pretáča ťažko a septum je rovné.
Vialka, ktorá je uzavretá príliš veľkou silou sa pozná podľa toho, že jej viečkom nemožno spravidla vôbec otáčať a navyše má prehnuté septum (smerom dovnútra). Ak dôjde k prepichnutiu septa ihlou mikrostriekačky, dôjde k veľkému namáhaniu septa a tým k narušeniu tesnosti vialky.
Vialka, ktorá nemá správne uzavreté viečko, vďaka malej sile krimpovacích klieští, sa prejavuje ľahkým otáčaním viečka av niektorých prípadoch aj neobopnutým hliníkovým materiálom okolo spodného okraja goliera vialky.
Správnu silu uzatváracích klieští môžete nastaviť.
U starších typov klieští sa nastavenie sily vykonáva otáčaním imbusového kľúča vo vnútri čeľustí. Kliešte mávajú aj dorazovú skrutku, ktorou sa nastavuje bezpečnostná vzdialenosť, aby nedošlo k použitiu príliš vysokej sily a tým k netesnosti alebo dokonca k mechanickému poškodeniu vialky.

Chromatogramy

Obr. 1: Chromatogram vnútorných štandardov, SD1 a SD2. Separácia 5 nmol aminokyselín pomocou LC-MS MetAmino^®

Obr. 2: Chromatogram reálnej vzorky: Separácia aminokyselín vo vzorke piva Budvar 12˚ (25 µl vzorky bolo nanesenej na kolónu). Vysoká účinnosť našej kolóny a vysoké rozlíšenie prispievajú k peknej separácii signálov. Vzorka testovaná pomocou LC-MS MetAmino^®

Obr. 3: Chromatogram reálnej vzorky: Separácia aminokyselín prítomných v krvnom sére (25 µL vyzrážaného séra bolo naneseného na kolónu). Vysoká účinnosť našej kolóny a vysoké rozlíšenie prispievajú k peknej separácii signálov. Vzorka testovaná pomocou LC-MS MetAmino^®

Príprava vzoriek

Nižšie je uvedený stručný postup prípravy vzorky. Podrobný postup nájdete v užívateľskej príručke MetAmino^® .

Príprava vzorky pre LC-MS analýzu prebieha nasledovne:

1. Napipetujte 100 μl vašej vzorky (sérum, plazma, ...) do centrifugačnej skúmavky a pridajte 100 μL precipitačného média. Centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
2. Napipetujte 25 μl vašej vyzrážanej vzorky do novej centrifugačnej skúmavky a pridajte 10 μl roztoku s vnútornými štandardmi.
3. Napipetujte 20 μl katalytického roztoku a 5-10 sekúnd vortexujte.
4. Napipetujte 10 μl reagenčného (derivatizačného) činidla a vortexujte 5-10 sekúnd. Nechajte derivatizáciu prebiehať aspoň 2-3 minúty.
5. Aktivujte a ekvilibrujte sorbent v MSPE filtri pridaním:
   1. 200 μl aktivačného média sorbentu MSPE, potom centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
   2. 200 μl ekvilibračného média sorbentu MSPE, potom centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
6. Vylejte eluát prešlý membránou.
7. Derivatizačnú reakčnú zmes zrieďte 400 μl riediaceho a premývacieho média a vortexujte 5-10 sekúnd.
8. Zriedenú reakčnú zmes (typicky 450-500 μl) naneste na aktivovaný a naekvilibrovaný MSPE filter a nechajte 1-2 minúty stáť. Centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
9. Vylejte eluát prešlý membránou.
10. Premyte sorbent v MSPE filtri 200 μl zrieďovacieho a premývacieho média a centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
11. Umiestnite MSPE filter do novej centrifugačnej skúmavky, pridajte 200 μl elučného média a centrifugujte 30 až 60 sekúnd pri 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
12. Preneste eluát do novej vialky a umiestnite ju do autosamplera. Vzorka je pripravená pre LC-MS analýzu.

Príprava vzorky pre GC-MS analýzu prebieha nasledovne:

1. Do reakčnej sklenenej skúmavky napipetujte 25 μl vzorky a 10 μl roztoku s vnútornými štandardmi.
2. Do reakčnej sklenenej skúmavky napipetujte 20 μl redukčného činidla a krátko, 5 až 10 sekúnd, vortexujte. Nechajte 1 až 2 minúty pôsobiť.
3. Do reakčnej sklenenej skúmavky napipetujte 25 μl základného roztoku.
4. Potom pridajte 50 μl reagenčného (derivatizačného) činidla a vortexujte 5 až 10 sekúnd.
5. Napipetujte 25 μl katalytického roztoku do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte.
6. Znovu napipetujte 25 μl katalytického roztoku do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte. Nechajte 1-2 minúty odstáť. Emulzia sa postupne rozdelí na dve vrstvy.
7. Napipetujte 50 μl extrakčného média do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte.
8. Napipetujte 25 μl kyslého média do reakčnej sklenenej skúmavky a 5 až 10 sekúnd vortexujte. Potom centrifugujte 30 až 60 sekúnd 1 500 ×g (6 000 ot./min.).
9. Preneste organickú (hornú) vrstvu (50-100 µL) do autosamplerovej vialky s inzertom. Vzorka je pripravená na analýzu GC-MS.

Obsah sady

MetAmino^® kit obsahuje všetky činidlá, médiá a chemikálie. Obsah štartovacej sady je uvedený v tabuľkách nižšie:

Obsah súpravy LC-MS pre 100 vzoriek:

Obsah súpravy GC-MS pre 100 vzoriek:

Popis

Naše sady MetAmino^® LC-MS a GC-MS poskytujú rýchlu, robustnú, reprodukovateľnú a precíznu metódu pre analýzu aminokyselín, ktorá zahŕňa ako prípravu vzoriek, tak aj chromatografickú separáciu.

Metóda využívajúca LC-MS je založená na mikro-extrakcii na pevnej fáze využívajúc špeciálne mikrospin filtre ( MSPE ) s novo vyvinutým sorbentom a integrovanou membránou 0,22 µm, metóda GC-MS využíva na prípravu mikroextrakciu kvapalina-kvapalina ( LLME ). Po tejto predúprave je vzorka analyzovaná v LC-MS (GC-MS). Celkovo trvá príprava vzorky pre LC-MS asi 8 minút a analýza vzorky 12 minút, takže celá doba experimentu je iba 20 minút. Celková doba experimentu GC-MS je dokonca kratšia - zhruba 17 minút.

Táto jedinečná sada spĺňa všetky požiadavky laboratórií a je navrhnutá pre všetkých koncových užívateľov, ktorí hľadajú jednoduchú analytickú metódu a vysokú účinnosť separácie.

Prehľad sorbentov MSPE

Sorbenty pre techniku MSPE sú zvolené tak, aby pokryli čo najširšie pole aplikácií. MSPE SpeExtra C18 je hydrofóbny typ oktadecyl silikagélu so špeciálnym endcappingom s veľmi širokým uplatnením. Je vhodný pre celý rad analytov, horšiu retenciu vykazuje pre polárne zlúčeniny. MSPE SpeExtra C18-P je polárne modifikovaný monomérny oktadecyl silikagél. Ponúka rôzne typy interakcie: dipól-dipól, π- π a hydrofóbny. Je teda vhodný pre aromatické a polárne zlúčeniny. MSPE SpeExtra HLB je polymérny sorbent s vysokým merným povrchom a špeciálnym endcappingom. Má hydrofilnú a lipofilnú modifikáciu zaisťujúcu univerzálne použitie a vyššiu kapacitu ako C18 silikagel. MSPE SpeExtra WAX je polymérny sorbent na báze PS/DVB so špeciálnym end-cappingom a vysoko špecifickým povrchom, ktorý sa pripravuje kopolymerizáciou styrénu a divinylbenzénu, pričom vytvára slabé aniónové interakcie.

Čistenie a testovanie na konope

Konope obsahuje stovky kanabinoidov, pričom kanabidiol (CBD) je v rastline najrozšírenejší a Δ 9-Tetrahydrocannabinol (THC) je aktívnou zložkou spôsobujúcou psychotropné účinky. Existuje však oveľa viac zlúčenín, ktoré sú vytvárané rastlinou konope a boli skúmané pre ich lekárske účinky. Tento limit si často vyžaduje úpravu destilovaného konopného extraktu (odstránenie THC z východiskového extraktu) a možno ju dosiahnuť pomocou preparatívnej chromatografie, napr. pomocou systému puriFlash^® XL-Cannabis. HPLC analýza východiskového materiálu (destilátu), frakcií zhromaždených počas procesu čistenia a konečného produktu môže byť vykonaná analytickým systémom Advion AVANT HPLC-UV. Ako čistenie, tak analytické metódy sú uvedené v tejto božúre a tvoria kompletné riešenie na odstránenie THC v konopnom priemysle.

• prístroj puriFlah^® L-Canabis s výkonom až 4,3 kg/deň (kolóny do 15 cm ID)
• nástroj puriFlah^® XL-Canabis s výkonom až 12,2 kg/deň (kolóny do 20 cm ID)
• Plate Express TLC čítačka doštičiek