Chromatografia

Kovové ferulky SilTite pro GC a GC/MS

Ferulky SilTite sú unikátne kovové ferulky dizajnované pre spojenie kremenných kapilárnych GC kolón a kapilár s hmotnostnými spektrometrami a GC injektormi. Už po prvom správnom utiahnutí poskytujú ferulky SilTite tesné spojenie aj po mnohých teplotných cykloch bez nutnosti ďalšieho doťahovania. Ferulky SilTite sa používajú v spojení s maticami a fitinkami SGE SilTite s katalógovými číslami:

• SGE*073200
• SGE*073201
• SGE*073202
• SGE*073203

Prečo zvoliť ferulky SilTite?

• eliminácia netesností (pozri obrázky nižšie)
• nie je nutné ďalšie doťahovanie, a to dokonca ani po viacerých teplotných cykloch
• ferulky zostávajú trvale fixované na kolóne a nepriľnú k matici
• žiadna kontaminácia z materiálu Vespel alebo grafit - 100% kov
• ideálne pro vysokotlakové aplikácie (fast GC)
• vhodné pro pripojenie k injektorom
• maximálna teplota >500°C

Obr. 1 Stopy vzduchu v MS systéme po 5 teplotných cykloch pri použití feruliek Vespel/grafit.

Obr. 2 MS spektrum po 5 teplotných cykloch pri použití feruliek Siltite. (pri MS, nie sú prítomné netesnosti dokonca aj po 400 teplotných cykloch 70ºC a 400ºC).

Vylepšenie tesnenia u injektorov GC Agilent

Tesnenie injektora GC Agilent, ktoré nevyžaduje podložku má výrazne vyššiu tesnosť ako originálny diel výrobcu a je s ním oveľa jednoduchšia manipulácia.

• zabraňuje permeácii kyslíka do nosného plynu a tým predlžuje životnosť kolóny
• o-krúžok (Vespel^®) na okraji disku výrazne uľahčuje uťahovanie a nevyžaduje použitie veľkej sily
• o-krúžok (Vespel^®) na spodnej časti disku eliminuje nutnosť použitia podložky (jednoduchšia inštalácia).

Split/splitless injektor v plynových chromatografoch Agilent obsahuje v spodnej časti kovové tesnenie, ktoré sa ťažko vymieňa a nevykazuje dokonalú tesnosť (spojenie kov-kov). Aj pri dotiahnutí veľkou silou vykazuje spojenie kov-kov pomerne veľké netesnosti, obzvlášť potom, ak sa tesnenie použije opakovane. To má za následok prenikanie atmosférického kyslíka do nosného plynu a pozvoľnú degradáciu stacionárnej fázy inštalovanej GC kolóny.

Porovnanie tesnosti originálneho tesnenia Agilent s tesnením Restek

Patentované tesnenie Dual Vespel^® Ring Inlet Seal (Restek) výrazne zvyšuje tesnosť injektora aj po opakovaných teplotných cykloch bez nutnosti opätovného doťahovanie matice. Tesnenie zabezpečujú dva o-krúžky z materiálu Vespel^® - jeden je umiestnený na hornej strane disku, druhý na jeho spodnej časti. Tieto o-krúžky eliminujú nutnosť použitia podložky a uľahčujú doťahovanie matice, ktorá disk drží (je nutná veľká sila pre jej dotiahnutie). Testy tesnosti na únik hélia preukázali dokonalú tesnosť aj pri ľahkom dotiahnutí tesnenia.

Varianty tesnenia

• nerezové
• pozlátené
• s deaktiváciou Siltek

Výber vhodného septa pro GC

GC Agilent

GC DANI

GC Perkin-Elmer

GC Shimadzu

GC Varian

GC Thermo Scientific

Mikrostriekačky

Čistenie mikrostriekačiek a ich údržba

Chromatografické striekačky sú veľmi presné a kvalitné dávkovače mikrolitrových množstiev kvapalín. Napriek tomu sa jedná o výrobky, o ktoré je potrebné sa dobre starať. Zaistíte tým ich dlhú životnosť a skvalitníte dávkovanie vašich vzoriek do chromatografie.

Niektoré rozpúšťadlá, ako napr. halogénované uhľovodíky, môžu poškodiť vysoko odolné lepidlo (cementované časti) fixujúce ihlu k telu mikrostriekačky. To môže viesť k stuhnutiu piestu alebo upchatie ihly.

Čistenie skleneného tela striekačky

Striekačky Hamilton a SGE je najlepšie čistiť rozpúšťadlom so známou rozpúšťacou schopnosťou, aby sa najlepšie odstránili zvyšky vzoriek. Pri čistení uprednostnite rozpúšťadlá neobsahujúce alkalické zlúčeniny, fosfáty alebo detergenty. Hamilton ponúka čistiaci roztok schopný biodegradácie (katalógové číslo 18311).

Striekačku (vnútorný priestor skleneného tela) opláchnite najprv deionizovanou vodou, acetónom alebo iným rozpúšťadlom rozpustným vo vode (napr. metanolom). Následne opláchnite striekačku hexánom a vysušte. Vyvarujte sa dlhodobého ponorenia striekačky do čistiaceho roztoku.

Striekačky MICROLITER™ (rada 600, 700, 800 a 900)

• Opláchnite striekačku rozpúšťadlom, ktorá najlepšie rozpúšťa reziduá vzorky.
• Vyberte piest z tela striekačky a jemne ho utrite handričkou, ktorá nezanecháva vlákna (ideálne je handričku namočiť do zvoleného rozpúšťadla). Vložte piest späť do tela striekačky a nasajte/vypustite niekoľkokrát za sebou deionizovanú vodu. Postup opakujte s acetónom alebo metanolom a nakoniec hexánom alebo obdobným nepolárnym rozpúšťadlom.
• Striekačku vysušte.
• Ak pracujete s roztokom solí, odporúčame skladovať striekačku s vytiahnutým piestom.

Striekačky GASTIGHT® (rada 1000, 1700 a 1800)

• Opláchnite striekačku rozpúšťadlom, ktoré najlepšie rozpúšťa rezíduá vzorky.
• Vyberte piest z tela striekačky a jemne ho utrite handričkou, ktorá nezanecháva vlákna (ideálne je handričku namočiť do zvoleného rozpúšťadla). Vložte piest späť do tela striekačky a nasajte/vypustite niekoľkokrát za sebou deionizovanú vodu. Postup opakujte s acetónom alebo metanolom a nakoniec hexánom alebo obdobným nepolárnym rozpúšťadlom.
• Striekačku vysušte.
• Ak pracujete s roztokmi solí, odporúčame skladovať striekačku s vytiahnutým piestom.

Skladovanie striekačiek

Striekačky odporúčame skladovať v originálnom obale. Ten dokonale chráni a navyše vám poskytuje informáciu o type striekačky.

Termálna desorpcia

V tejto sekcii sme pre Vás pripravili informácie dôležité pri práci s termálnou desorpciou. Jedná sa o pomerne náročnú analytickú techniku, pre ktorú Vám tieto informácie uľahčia prácu. Pokiaľ hľadané informácie nenájdete, kontaktujte našich špecialistov.

Parametre sorbentu

Meranie emisií materiálov

Skladovanie a transport sorpčných trubičiek

Kolóny ChromShell a rozpúšťadlá

Pri používaní HPLC kolón ChromShell^® znamená vziať do úvahy niekoľko dôležitých charakteristík, ktoré majú organické rozpúšťadlá používané v mobilnej fáze. Viskozita je najdôležitejším parametrom, pretože rozpúšťadlá s vysokou viskozitou sú príčinou zvýšenia protitlaku v HPLC systéme. Ďalšími dôležitými parametrami sú "UV cutoff", index polarity a cena. Rozpúšťadlá s vysokým parametrom "UV cutoff" zhoršujú citlivosť v UV/VIS detektoroch a rozpúšťadlá s nízkou polaritou spôsobujú rýchlejšiu elúciu organických zlúčenín a sú často používané na čistenie alebo regeneráciu kolón.

Acetonitril

je pravdepodobne najlepšie organické rozpúšťadlo používané v zmesi s vodou, pretože poskytuje najnižší protitlak v HPLC systémoch. Súčasne má veľmi nízky "UV cutoff" a teda výbornú citlivosť v UV / Vis detektoroch. Najväčšou nevýhodou je jeho cena, ktorá sa v poslednej dobe výrazne zvýšila.

Metanol

je ďalšie veľmi obľúbené rozpúšťadlo, ktoré má podobnú elučnú silu ako acetonitril, má relatívne nízku absorbanciu v UV oblasti a je oveľa lacnejšie ako acetonitril. Hlavnou nevýhodou metanolu pri jeho používaní s HPLC kolónami s malou veľkosťou častíc je tvorba vyššieho protitlaku, ktorý môže presiahnuť limit HPLC prístroja.

Acetón

je menej používané rozpúšťadlo vďaka vysokej absorpcii v UV oblasti. Niekedy sa využíva pri analýzach zlúčenín absorbujúcich pri vyšších vlnových dĺžkach alebo v spojení s inými typmi detektorov, napr. MS.

Etanol

nie je bežne odporúčaný pre používanie s HPLC. V zmesi s vodou spôsobuje vysoký protitlak.

Izo-, N-propanol

majú relatívne silnú elučnú silu a sú väčšinou používajú na čistenie kolón pri nízkych prietokoch, pretože tiež generujú vysoký protitlak.

Tetrahydrofurán

má podobnú elučnú silu ako n-propanol, ale vďaka vyššej cene je používaný menej často.

Deaktivácia skla

Deaktivácia skla pomocou DMDCS

Dimetyldichlórsilán (DMDCS) reaguje s aktívnymi hydroxylovými skupinami prítomnými na povrchu skla a tým vytvára deaktivovanú plochu. Tento postup zaistí inertné sklenené nádoby určené predovšetkým pre citlivé zlúčeniny.

Postup

V priebehu deaktivácie sa vyvíja chlorovodík (HCl), preto je nutné uskutočniť deaktiváciu v digestore.

• K deaktivácii použite 5% roztok DMDCS v toluéne. Roztok môžete pripraviť rozpustením 20 ml DMDCS v 400 ml toluénu. Roztok uchovávajte v tmavej sklenenej nádobe pri laboratórnej teplote.
• Ponorte sklenenú nádobu určenú na deaktiváciu do 5% roztoku DMDCS na 15 až 30 minút.
• Opláchnite sklo dvakrát toluénom.
• Ponorte sklo do metanolu na 15 minút.
• Opláchnite sklo metanolom.
• Vysušte sklo čistým dusíkom (bez vlhkosti a uhľovodíkov).

Nastavenie lineárnej rýchlosti

Lineárna rýchlosť je dôležitý parameter v chromatografii, ktorý má veľký vplyv na separačnú účinnosť, preto je dôležitá pri vývoji metód stanovenia mŕtveho objemu a času.

Meranie lineárnej rýchlosti v GC

Mŕtvy čas sa stanovuje nástrekom 2 μl zlúčeniny, ktorá nemá na chromatografickej kolóne retenciu a je detekovaná použitím detektora. Plynotesnou striekačkou odoberte plyn alebo plynnú fázy zlúčeniny a nadávkujte ju do chromatografu. Zmerajte presne čas nástreku a čas elúcie, z ktorého sa stanoví mŕtvy čas.

Poznámka: Niektoré zlúčeniny môžu mať nepatrnú retenciu na kolónach so silným filmom, ktorá je však pre podobné typy kolón reprodukovateľná.

Použitie chirálnych kolón

Viete ako správne používať chirálne kolóny na báze celulózy/amylózy?

Chirálne kolóny sú transportované v zmesi n-hexán/2-propanol (9:1,v/v). Každá kolóna je individuálne testovaná a je vždy má certifikát kvality so separačnými parametrami pre stanovenie trans-stilbén oxidu.

Použitie mobilných fáz

Kolóny môžu byť použité ako v normálnej fáze (zmesi n-alkánov/alkoholov), v reverznej fáze (zmesi voda/MeOH, voda/ACN a pufer/MeOH a tlmivý/ACN), alebo v polárnych organických rozpúšťadlách (100% ACN, nižšia alkoholy a ich zmesi).

Kompatibilita mobilných fáz

Pri zmenách mobilnej fázy je vždy potrebné dodržať stanovený postup na premytie kolón. Je potrebné vždy vyhodnotiť miešateľnosť jednotlivých použitých rozpúšťadiel. Pre bezpečné prevedenie kolóny z hexánu do metanolu (ACN) a opačne použite vždy ako transportný solvent 100% 2-propanol pri prietoku 0,2 - 0,5 ml/min. Pre spoľahlivé odstránenie pôvodnej mobilnej fázy prepláchnite kolónu približne 10-tich násobkom objemu kolóny (tzn. 25 ml 100% 2-propanolu pre kolónu 250 x 4,6 mm, 15 ml pre 150 x 4,6 mm). Ďalej, ak je použitý pufor nemiešateľný s 2-propanolom, kolónu ešte prepláchnite pred a po použití tohto pufra 100% vodou.

Použitie modifikátorov mobilnej fázy

Pre niektoré kyslé či bázické chirálne látky je potrebné použiť špecifické modifikátorov MF za účelom dosiahnutia správnej chirálnej separácie či požadovaného tvaru píkov. Dietylamín, etanolamín alebo butylamín v koncentráciách 0,1 - 0,5 % môžu byť použité pre bázické vzorky, zatiaľ čo kyselina octová či trifluóroctová typicky v koncentrácii 0.1 - 0.2 % pre vzorky kyslé. Zmesi bázických a kyslých aditív sú rovnako možné, napr. dietylamínacetát či trifluóracetát. Kolóny poskytujú rovnaké výsledky pri použití všetkých vyššie uvedených rozpúšťadiel a modifikátorov MF v uvedených koncentráciách.

Nekompatibilné rozpúšťadlá

Chirálne kolóny sú vyrobené viazaním rôznych derivátov polysacharidov na povrch silikagélu. Všetky rozpúšťadlá rozpúšťajúce deriváty polysacharidov nesmú prísť do styku so stacionárnou fázou, a to aj v akejkoľvek koncentrácii, napr. THF, acetón, chlórované uhľovodíky, etylacetát, dimetylsulfoxid, DMF, N-metylformamid a pod.

Tlakový limit

Prietok mobilnej fázy by mal byť nastavený tak, aby spätný tlak neprekročil hodnotu 300 barov (4300 psi).

Pracovná teplota

Za použitia štandardných mobilných fáz (ako napr. N-alkánov / alkoholov) je teplotný rozsah kolón 0-50 ° C.

Uchovávanie kolón

Pre dlhšie trvajúce uskladnenie je odporúčané skladovať kolóny v zmesi n-hexán/2-propanol (9:1, v/v). Kolóny používané v reverznej MF by mali byť najprv premyté vodou (kedykoľvek bol použitý pufor ako modifikátor reverznej MF) a potom metanolom a/alebo len metanolom, ak pufor nebol použitý. Kolóna môže byť tiež uskladnená v metanole.

Predĺženie životnosti kolón Lux

Chromservis odporúča použitie univerzálneho systému ochrany analytických kolón Security Guard a zodpovedajúcich predkolóniek na zabezpečenie dlhodobej a bezproblémovej separácie na kolónach Lux, zvlášť pri separáciách vzoriek získaných zo zložitých a komplexných matríc. Optimálne by mala byť vzorka kompletne rozpustená v zodpovedajúcej MF a potom filtrovaná cez filter injekčnej striekačky s pórovitosťou 0.45 μm.

Rady a tipy

Táto stránka obsahuje technické informácie, tipy a rady pre vaše rozhodovanie a odporúčania pri výbere chromatografického príslušenstva.

• Dynamický headspace
• Inštalácia GC kolón
• Ako zaobchádzať s chirálnymi HPLC kolónami
• Linery pre GC
• Nastavenie optimálnej lineárnej rychlosti
• Návod na deaktiváciu sklenených nádob
• Postup pri kondicionování GC kolón
• Termálna desorpcia
• Údržba striekačiek
• Voľba GC septa
• Voľba LC kolóny
• Zlepšenie tesnosti injektorov GC Agilent
• Zlepšenie tesnosti pripojenia GC kapilárnych kolón
• Zvýšenie pomeru signál/šum v GC systémoch