Chromatografia

Dopuszczalne dostosowania metod HPLC

Kolumny Chromservis HPLC odpowiadające metodom USP oraz zakres, w jakim można dostosować różne parametry testu chromatograficznego bez zasadniczej modyfikacji farmakopealnych procedur analitycznych, są wymienione w tej nocie technicznej . Zmiany inne niż wskazane wymagają ponownej walidacji postępowania.

Dozowanie próbki w chromatografii Flash

Próbki płynne lub stałe o małych lub dużych objętościach - ponieważ Twoje próbki są różnorodne, oferujemy kilka opcji dozowania na kolumnę, aby zagwarantować najlepsze możliwe wyniki.

„Suchy ładunek”

Dostępne są jednorazowe plastikowe wersje głośników „Dry Load” lub głośniki w wersji ze stali nierdzewnej. Nadają się one do wielokrotnego użytku, a ich zaletą jest także większa odporność na wyższe ciśnienie.
Za pomocą kolumny ze stali nierdzewnej „Dry Load” można natryskiwać ciała stałe na kolumnę preparatywną lub na kolumny typu flash, gdzie maksymalny opór ciśnienia kolumny z tworzywa sztucznego byłby niewystarczający.

Pętle dozujące

Nasza linia pętli dozujących oferuje objętości od 100 μL do 50 mL, dzięki czemu możemy zaspokoić wszystkie Twoje potrzeby.

Autosampler

Zautomatyzuj dozowanie próbek za pomocą naszego automatycznego podajnika próbek i dziesięciokrotnie zwiększ wydajność. PuriFlash ^® AS-1 umożliwia dozowanie próbek od 50 µL do 500 mL z automatycznym czyszczeniem zużytych probówek pomiędzy każdym wstrzyknięciem.

Dozowanie próbki zapewnia sekwencja oprogramowania InterSoft . Autosampler może być wyposażony w 6- lub 10-drogowy zawór elektryczny.

Platforma autosamplera posiada możliwość wykorzystania stojaka na probówki lub butelki o pojemności do 250 mL lub wykorzystania stojaków niestandardowych.

Pompa dozująca

Jeśli masz duże objętości próbek, które musisz umieścić na kolumnie flash lub preparatywnej, po prostu użyj naszej pompy, a następnie uruchom metodę. To jest takie proste!

Faza stacjonarna do HPLC

ASTRA - CHROMSERVIS

ARION - CHROMSERVIS

Na naszej stronie znajdziesz również instrukcję jak dbać o kolumny (U)HPLC Arion.

CHROMSHELL - CHROMSERVIS

KINETEX – FENOMENKS

*Kolumny mają stabilność w zakresie pH 1,5 do 10 w warunkach izokratycznych. W elucjach gradientowych ich stabilność mieści się w zakresie pH 1,5 do 8,5.

Kolumny Kinetex 2,6 µm o średnicy wewnętrznej 2,1 mm są stabilne do ciśnienia 1000 barów, w pozostałych przypadkach do 600 barów.

Wypróbuj kolumny ChromShell, którymi możesz zastąpić kolumny Kinetex.

LUNA – FENOMENKS

Bliźnięta - Fenomen

SYNERGIA – FENOMENKS

ONYKS – FENOMENKS

Jowisz – zjawisko

GraceSmart – ŁASKA

Alltech ^® Prevail - GRACE

Kolumny kapilarne / Nano LC ProteCol - SGE

JAK PRAWIDŁOWO ZACISKAĆ FIOLKI

Fiolki zaciskane są doskonałymi pojemnikami na próbki do automatycznych dozowników chromatografów gazowych i cieczowych oraz do przechowywania próbek lub roztworów kalibracyjnych. Dla odpowiedniej szczelności bardzo ważna jest technika ich zamykania. W przypadku wycieku spowodowanego niewłaściwym uszczelnieniem może nastąpić odparowanie rozpuszczalnika lub utrata analitów.
Prawidłowo zamkniętą fiolkę można rozpoznać po tym, że jej wieczko po zamknięciu z trudem obraca się, a przegroda jest prosta.
Fiolkę zamykaną ze zbyt dużą siłą można rozpoznać po tym, że jej wieczko najczęściej nie daje się w ogóle odkręcić, a dodatkowo posiada wygiętą przegrodę (do wewnątrz). Jeżeli przegroda zostanie przekłuta igłą mikrostrzykawki, przegroda zostanie mocno obciążona, co spowoduje pogorszenie szczelności fiolki.
Fiolka, która nie posiada prawidłowo zamkniętej nakrętki ze względu na małą siłę szczypiec zaciskających, objawia się łatwym obracaniem nakrętki oraz, w niektórych przypadkach, rozwarciem materiału aluminiowego wokół dolnej krawędzi szyjki fiolki.
Można ustawić odpowiednią siłę szczypiec zamykających.
W starszych typach szczypiec siłę reguluje się obracając klucz imbusowy wewnątrz szczęk. Szczypce posiadają również śrubę oporową, która służy do ustawienia bezpiecznej odległości, aby nie używać zbyt dużej siły i tym samym uniknąć wycieku, a nawet mechanicznego uszkodzenia fiolki.

Dane chromatogramu masowego

Ogromny. 1: Chromatogram masowy wzorców wewnętrznych, SD1 i SD2. Oddzielenie 5 nmol aminokwasów metodą LC-MS Metamino®

Ogromny. Ryc. 2: Chromatogram masowy próbki rzeczywistej: Rozdział aminokwasów w formule piwa Budvar 12˚ (na kolumnę naniesiono 25 µl próbki). Wysoka wydajność i wysoka rozdzielczość naszej kolumny przyczyniają się do dobrej separacji pików. Próbka testowana metodą LC-MS Metamino®

Ogromny. Ryc. 3: Chromatogram masowy próbki rzeczywistej: Rozdział aminokwasów obecnych w surowicy krwi (na kolumnę nałożono 25 µl wytrąconej surowicy). Wysoka wydajność i wysoka rozdzielczość naszej kolumny przyczyniają się do dobrej separacji pików. Próbka testowana metodą LC-MS Metamino®

przygotowanie próbki

Po wyodrębnieniu zawartości z matrycy można przystąpić do przygotowania próbki do analizy LC-MS/GC-MS.

Protokół ten jedynie w skrócie opisuje procedurę przygotowania próbki. Szczegółową procedurę można znaleźć w instrukcji obsługi Metamino^®.

Analiza LC-MS przebiega w następujący sposób:

1. Odpipetuj 100 μl wyekstrahowanej zawartości (surowicy, osocza, ...) i dodaj 100 μl podłoża wytrącającego. Wiruj przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
2. Odpipetuj 25 µl wytrąconej próbki i dodaj 10 µl roztworu wzorca wewnętrznego do każdej fiolki do przygotowania próbki.
3. Odpipetuj 25 μl roztworu katalizatora do każdej fiolki do przygotowania próbki i wiruj przez 5-10 sekund.
4. Odpipetuj 10 μl roztworu odczynnika do każdej fiolki do przygotowania próbki i wiruj przez 5-10 sekund. Pozwól, aby derywatyzacja przebiegała przez co najmniej 2-3 minuty.
5. Aktywuj i zrównoważ sorbent w filtrze mikrowirowym dodając:
   1. 200 µl podłoża aktywacyjnego MSPE, następnie wirować przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
   2. 200 µl podłoża do równoważenia sorbentu MSPE, następnie wirować przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
6. Wylać płyn przez membranę.
7. Rozcieńczyć mieszaninę reakcyjną derywatyzacji 400 µl środka do rozcieńczania i przemywania i wirować przez 5-10 sek.
8. Nałożyć rozcieńczoną mieszaninę reakcyjną (zwykle 450-500 µl) na zwilżony sorbent z filtrem mikrowirowym i odstawić na 1-2 minuty. Wiruj przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
9. Wylać płyn przez membranę.
10. Przemyć sorbent w filtrze mikrowirówkowym 200 µl rozcieńczenia i medium płuczącego, a następnie wirować przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
11. Umieścić filtr mikrowirówkowy w nowej fiolce wirówkowej, dodać 200 µl medium elucyjnego i wirować przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
12. Przenieść eluat do fiolki autosamplera. Próbka jest gotowa do analizy LC-MS.

Analiza GC-MS przebiega w następujący sposób:

1. Odpipetować 25 µl próbki docelowej i 10 µl roztworu wzorca wewnętrznego do każdej szklanej probówki reakcyjnej.
2. Odpipetować 20 µl środka redukującego do każdej szklanej probówki reakcyjnej i krótko wstrząsać przez 5 do 10 sekund. Odstaw na 1 do 2 minut.
3. Odpipetować 25 µl podłoża podstawowego do każdej szklanej probówki reakcyjnej i dodać 50 µl roztworu odczynnika (derywatyzacji) do każdej szklanej probówki reakcyjnej i wirować przez 5 do 10 sekund.
4. Odpipetować 25 µl roztworu katalizatora do każdej fiolki do przygotowania próbki i wirować przez 5 do 10 sekund.
5. Odpipetować 25 µl roztworu katalizatora do każdej fiolki do przygotowania próbki i wirować przez 5 do 10 sekund. Odstaw na 1-2 minuty. Emulsję stopniowo dzieli się na dwie warstwy.
6. Odpipetuj 50 μl ośrodka ekstrakcyjnego do każdej fiolki do przygotowania próbki i wiruj przez 5 do 10 sekund.
7. Odpipetuj 25 μl kwaśnego podłoża do każdej fiolki do przygotowania próbki i wiruj przez 5 do 10 sekund. Następnie wiruj przez 30 do 60 sekund przy 1500 g (6000 obr/min).
8. Przenieść warstwę organiczną (górną) (50-100 µl) do fiolki autosamplera z wkładką. Próbkę przygotowuje się do analizy GC-MS.

Zawartość zestawu

Zestaw MetAmino ^® zawiera wszystkie odczynniki, pożywki i chemikalia. Zawartość zestawu startowego przedstawiono w poniższych tabelach:

Zawartość zestawu LC-MS na 100 próbek:

Zawartość zestawu GC-MS na 100 próbek:

Opis

Nasze zestawy MetAmino ^® LC-MS i GC-MS zapewniają szybką, niezawodną, powtarzalną i dokładną procedurę analizy aminokwasów, która obejmuje zarówno przygotowanie próbki, jak i rozdział chromatograficzny.

Metoda LC-MS opiera się na mikroekstrakcji do fazy stałej przy użyciu specjalnych filtrów mikrospinowych ( MSPE ) z nowo opracowanym sorbentem i zintegrowaną membraną 0,22 µm, metoda GC-MS wykorzystuje mikroekstrakcję ciecz-ciecz ( LLME ) do przygotowania. Po tej wstępnej obróbce próbkę analizuje się w LC-MS (GC-MS). W sumie przygotowanie próbki do LC-MS zajmuje około 8 minut, a analiza próbki 12 minut, więc cały czas trwania eksperymentu wynosi tylko 20 minut. Całkowity czas eksperymentu GC-MS jest jeszcze krótszy – około 17 minut.

Ten unikalny zestaw spełnia wszystkie wymagania laboratoryjne i jest przeznaczony dla wszystkich użytkowników końcowych poszukujących prostej metody analitycznej i wysokiej wydajności separacji.

Przegląd sorbentów MSPE

Sorbenty do techniki MSPE dobierane są tak, aby obejmowały jak najszerszy zakres zastosowań. MSPE SpeExtra C18 to hydrofobowy rodzaj oktadecylowego żelu krzemionkowego ze specjalną końcówką o bardzo szerokim zastosowaniu. Nadaje się do szerokiego zakresu analitów, wykazując gorszą retencję dla związków polarnych. MSPE SpeExtra C18-P to modyfikowany polarnie monomeryczny oktadecylowy żel krzemionkowy. Oferuje różne rodzaje oddziaływań: dipol-dipol, π-π i hydrofobowe. Dlatego nadaje się do związków aromatycznych i polarnych. Sorbent polimerowy MSPE SpeExtra HLB o dużej powierzchni właściwej i specjalnej osłonie końcowej. Posiada hydrofilową i lipofilową modyfikację zapewniającą uniwersalne zastosowanie i większą pojemność niż żel krzemionkowy C18. MSPE SpeExtra WAX to sorbent polimerowy na bazie PS/DVB ze specjalnym zakończeniem i wysoce specyficzną powierzchnią, który powstaje w wyniku kopolimeryzacji styrenu i diwinylobenzenu, tworząc słabe oddziaływania anionowe.

Oczyszczanie i testowanie na konopie

Konopie zawierają setki kannabinoidów, przy czym kannabidiol (CBD) występuje w największej ilości w roślinie, a Δ 9-tetrahydrokannabinol (THC) jest aktywnym składnikiem wywołującym efekty psychotropowe. Istnieje jednak wiele innych związków, które są wytwarzane przez konopie indyjskie i zostały zbadane pod kątem ich działania leczniczego. Ograniczenie to często wymaga obróbki destylowanego ekstraktu z konopi (usunięcie THC z ekstraktu wyjściowego) i można je osiągnąć za pomocą chromatografii preparatywnej, takiej jak system puriFlashR XL-Cannabis. Analizę HPLC materiału wyjściowego (destylatu), frakcji zebranych podczas procesu oczyszczania oraz produktu końcowego można przeprowadzić za pomocą systemu analitycznego Advion AVANT HPLC-UV. Zarówno metody oczyszczania, jak i analityczne są przedstawione w tej piwonii i stanowią kompletne rozwiązanie do usuwania THC w przemyśle konopnym.

• Urządzenie puriFlah ^® L-Cannabis o wydajności do 4,3 kg/dzień (kolumny do 15 cm ID)
• Narzędzie do konopi puriFlah ^® XL o wydajności do 12,2 kg/dzień (kolumny do 20 cm ID)
• Czytnik płytek Plate Express TLC