Aminokwasy są kluczowymi elementami budulcowymi życia i odgrywają kluczową rolę w różnych szlakach metabolicznych. Działają głównie jako półprodukty, często niezwiązane bezpośrednio z białkami. Ze względu na ich złożoność chemiczną i zakres dynamiczny, ich wiarygodna analiza ilościowa i jakościowa w płynach biologicznych i tkankach ma kluczowe znaczenie dla informacji o wartościach odżywczych, identyfikacji związków i diagnostyki.
W tym celu opracowano prostą, elegancką i jak dotąd najszybszą metodę analizy bezcennych aminokwasów. Zestaw Metamino® oparty na LC/GC-MS oferuje kompleksowe rozwiązanie aż do 75 metabolitów, w tym podstawowych aminokwasów proteinogennych, amin biogennych i koenzymów, z możliwością dalszego rozszerzenia analitu.
3480 kB
3480 kB
Ogromny. 1: Chromatogram masowy wzorców wewnętrznych, SD1 i SD2. Oddzielenie 5 nmol aminokwasów metodą LC-MS Metamino®
Ogromny. Ryc. 2: Chromatogram masowy próbki rzeczywistej: Rozdział aminokwasów w formule piwa Budvar 12˚ (na kolumnę naniesiono 25 µl próbki). Wysoka wydajność i wysoka rozdzielczość naszej kolumny przyczyniają się do dobrej separacji pików. Próbka testowana metodą LC-MS Metamino®
Ogromny. Ryc. 3: Chromatogram masowy próbki rzeczywistej: Rozdział aminokwasów obecnych w surowicy krwi (na kolumnę nałożono 25 µl wytrąconej surowicy). Wysoka wydajność i wysoka rozdzielczość naszej kolumny przyczyniają się do dobrej separacji pików. Próbka testowana metodą LC-MS Metamino®
Po wyodrębnieniu zawartości z matrycy można przystąpić do przygotowania próbki do analizy LC-MS/GC-MS.
Protokół ten jedynie w skrócie opisuje procedurę przygotowania próbki. Szczegółową procedurę można znaleźć w instrukcji obsługi Metamino®.
Zestaw MetAmino ® zawiera wszystkie odczynniki, pożywki i chemikalia. Zawartość zestawu startowego przedstawiono w poniższych tabelach:
Przedmiot | Rodzaj fiolki | Objętość w fiolce (ml) | Liczba fiolek (100 próbek) |
Roztwór wzorców aminokwasów SD1 | Fiolka 2 ml | 0,25 | 1 |
Wzorce aminokwasów SD2 w postaci proszku | Fiolka 2 ml | - | 2 |
Rozwiązanie z wewnętrznymi standardami (IS) | Fiolka 2 ml | 1.1 | 1 |
Standardowe rozcieńczenie aminokwasów (AASDM) | Fiolka 4 ml | 1.4 | 1 |
Medium aktywujące sorbent MSPE (WES) | Fiolka 40 ml | 22 | 1 |
Medium równoważące sorbent MSPE (EQS) | Fiolka 40 ml | 22 | 1 |
Roztwór katalityczny (CTS) | Fiolka 4 ml | 2.2 | 1 |
Odczynnik (derywatyzacja) (RDS) | Fiolka 4 ml | 1.1 | 1 |
Medium do rozcieńczania i przemywania (DWM) | Fiolka 40 ml | 33 | 2 |
Medium elucyjne (ELM) | Fiolka 40 ml | 22 | 1 |
Medium wytrącające (PM) | Fiolka 40 ml | 11 | 1 |
Przedmiot | Ilość (100 próbek) | Notatka |
Kolumna MetAmino® HPLC | 1 kawałek | Specjalna faza stacjonarna |
Stojak na maksymalnie 80 probówek wirówkowych | 1 kawałek | |
Filtry Microspin z sorbentem MetAmino ® | 100 szt | Kolumna wewnętrzna Membrana o grubości 0,22 µm |
Probówki wirówkowe (2 ml) | 400 szt | |
Fiolki do automatycznego podajnika próbek (zakrętka 9 mm) | 100 szt | Łącznie z przegrodą i pokrywkami |
Przedmiot | Rodzaj fiolki | Objętość w fiolce (ml) | Liczba fiolek (100 próbek) |
Standardy aminokwasów SD1 (roztwór) | Fiolka 2 ml | 0,25 | 1 |
Wzorce aminokwasów SD2 w postaci proszku | Fiolka 2 ml | - | 2 |
Rozwiązanie z wewnętrznymi standardami (IS) | Fiolka 2 ml | 1.1 | 1 |
Standardowe rozcieńczenie aminokwasów (AASDM) | Fiolka 4 ml | 1.4 | 1 |
Środek redukujący (RA) | Fiolka 4 ml | 2,75 | 1 |
Rozwiązanie podstawowe (BM) | Fiolka 4 ml | 2,75 | 1 |
Roztwór katalityczny (CTS) | Fiolka 40 ml | 5.5 | 1 |
Odczynnik (derywatyzacja) (RDS) | Fiolka 40 ml | 5.5 | 1 |
Medium ekstrakcyjne (EM) | Fiolka 40 ml | 5.5 | 1 |
Medium kwaśne (AM) | Fiolka 4 ml | 2,75 | 1 |
Przedmiot | Kwota | Notatka |
Kolumna MetAmino® GC | 1 kawałek | Specjalna faza stacjonarna |
Szklane probówki reakcyjne | 100 szt | - |
Stojak na maksymalnie 80 probówek reakcyjnych | ||
Fiolki do automatycznego podajnika próbek (zakrętka 9 mm) | 100 szt | Łącznie z przegrodą i pokrywkami |
Wkładki do fiolek autosamplera | 100 szt | - |
Nasze zestawy MetAmino ® LC-MS i GC-MS zapewniają szybką, niezawodną, powtarzalną i dokładną procedurę analizy aminokwasów, która obejmuje zarówno przygotowanie próbki, jak i rozdział chromatograficzny.
Metoda LC-MS opiera się na mikroekstrakcji do fazy stałej przy użyciu specjalnych filtrów mikrospinowych ( MSPE ) z nowo opracowanym sorbentem i zintegrowaną membraną 0,22 µm, metoda GC-MS wykorzystuje mikroekstrakcję ciecz-ciecz ( LLME ) do przygotowania. Po tej wstępnej obróbce próbkę analizuje się w LC-MS (GC-MS). W sumie przygotowanie próbki do LC-MS zajmuje około 8 minut, a analiza próbki 12 minut, więc cały czas trwania eksperymentu wynosi tylko 20 minut. Całkowity czas eksperymentu GC-MS jest jeszcze krótszy – około 17 minut.
Ten unikalny zestaw spełnia wszystkie wymagania laboratoryjne i jest przeznaczony dla wszystkich użytkowników końcowych poszukujących prostej metody analitycznej i wysokiej wydajności separacji.