Хроматография

Выбор капилляров для различных скоростей потока

я бы	Поток	Цвет	ИЗ
0,13 мм	До 2,0 мл/мин	Красный	1/16"
0,18 мм	До 5,0 мл/мин	Желтый	1/16"
0,25 мм	До 20 мл/мин	Синий	1/16"
0,50 мм	До 50 мл/мин	апельсин	1/16"
0,75 мм	До 100 мл/мин	Зеленый	1/16"
1,0 мм	До 200 мл/мин	Серый	1/16"
1,59 мм	До 500 мл/мин		1/8 "".
2,40 мм	До 1000 мл/мин		1/8 "".

Дюймы в мм - дюйм x 25,4 = мм

Футы на метр - футы x 0,3048 = метр

Давление в колонке при скорости потока 1 мл/мин

Р = 2,1 хдх 10,13 хч /ч ² х вп ²

Р – давление (МПа)
L – длина колонны в мм
h - динамическая вязкость (для воды = 1)
d – внутренний диаметр колонны в мм
vp – размер частиц в мкм

Давление на колонке 4,6 x 250 мм, 5 мкм будет составлять примерно 100 бар при скорости потока 1,0 мл/мин.

Выбор колонки в зависимости от размера впрыска и ее производительности

ID (мм)	Значение впрыска (мкл)	Емкость колонки (мг)	Поток (мл/мин)
4.6	5-100	1	0,5 - 2,0
10	100-1000	5	4,0 - 15,0
21,2	1000-5000	20	10 – 50
30	2000 – 10 000	40	40 – 100
50	5 000 – 20 000	120	100-300
100	10 000 – 50 000	500	400–1000

pK kyselin a zásad používaných jako aditivum pro mobilní fáze HPLC

pK _a кислых буферов при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы

буфер	Температура (°С)	ПК ₁	ПК ₂		ПК ₃
ACES 2-[(2-амино-2-оксоэтил)амино]этансульфоновая кислота	20	6,9	-		-
Уксусная кислота	25	4,8	-		-
Борная кислота	20	9.1	12,7		13,8
CAPS 3-(циклогексиламино)этансульфокислота	20	10.4	-		-
Лимонная кислота	25	3.1	4,8		6.4
Муравьиная кислота	20	3,8	-		-
Глицин	25	2.3	9,6		-
Глицилглицин	20	8.4	-		-
HEPES N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота	20	7.6	-		-
имидазол	20	7,0	-		-
МЭС 2-(N-морфолино)этансульфокислота	20	6.2	-		-
MOPS 3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота	20	7.2	-		-
Щавелевая кислота	25	1,3	4.3		-
Фосфорная кислота	25	2.1	7.2		12,7
TES 2-[трис(гидроксиметил)метил]аминоэтансульфокислота	20	7,5	-		-
Трифторуксусная кислота	25	0,3	-		-
Трицин N-[трис(гидроксиметил)метил]глицин	20	8.2	-		-
ТРИС Трис(гидроксиметил)аминометан	20	8.3	-		-
pK _b оснований при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы
Базы	Температура (°С)	ПК ₁	ПК ₂	ПК ₃
аммиак	25	9.3	-	-
Диэтиламин	20	11.1	-	-
Диметиламин	25	10,7	-	-
Этиламин	20	10,8	-	-
Этилендиамин	20	10.1	7,0	-
Метиламин	25	10,7	-	-
Морфолин	25	8.3	-	-
Триэтиламин (ТЭА)	18	11,0	-	-
Триметиламин	25	9,8	-	-

Позн: Размажь pH, пройди этот пуф входной je v rozsahu pK ± 1. Je třeba také vzít v uvahu UV Cutoff použitého pufru (табл. 2)

Applications and support in UHPLC

Хроно Уменьшение масштаба (перенос метода с традиционной ВЭЖХ на УВЭЖХ)

Пропускная способность пробы (Как мелкие частицы увеличивают пропускную способность пробы?)

Scale down in UHPLC

Процедура уменьшения масштаба от обычной ВЭЖХ до УВЭЖХ требует оптимизации селективности и эффективности колонок. Как только мы закончим разработку этого метода, мы можем выполнить процедуру масштабирования. Для определения эквивалентных условий запуска можно использовать несколько простых расчетов . В этой статье они описаны последовательно.

Настройка размера столбца

Первый расчет определяет соответствующую длину столбца. Сохранение той же длины колонки при уменьшении размера частиц увеличит количество теоретических тарелок в данной длине колонки. Следовательно, длину столбца можно сократить без потери разрешения. Используя уравнение 1 и правильно регулируя длину столбца, мы можем сохранить такое же разделение.

Регулировка объема инъекции

Как только мы определили правильную длину колонки, мы можем определить соответствующий объем инъекции. Уменьшение внутреннего диаметра и длины колонки уменьшает общий объем колонки и вместимость пробы. Таким образом, мы должны изменить объем впрыска, как описано в уравнении 2 . Обратите внимание, что, поскольку общий объем колонки уменьшился, важно, чтобы растворитель пробы соответствовал исходному составу подвижной фазы. Несоответствие растворителей образца может привести к невоспроизводимым временам удерживания, эффективности и даже изменениям в селективности.

Регулировка расхода

Скорость потока должна быть отрегулирована для поддержания сравнимой линейной скорости через колонку с меньшим внутренним диаметром. Линейная скорость определяется как расстояние, которое проходит подвижная фаза во времени, тогда как скорость потока представляет собой объем подвижной фазы, который проходит во времени. Для поддержания той же линейной скорости, которая важна для поддержания эффективности, скорость потока должна уменьшаться по мере уменьшения внутреннего диаметра колонки. Кроме того, поскольку меньшие размеры частиц приводят к более высоким оптимальным линейным скоростям, изократические скорости потока следует рассчитывать с учетом размера частиц. Уравнение 3 можно использовать для простой и быстрой оценки скорректированной скорости потока, необходимой для эквивалентной хроматографии. Также важно отметить, что более высокие скорости потока меньше влияют на размер частиц <2 мкм, поэтому более высокие скорости потока можно использовать в изократических системах без отрицательного влияния на пиковую эффективность.

Настройка временной программы

Наконец, после того как мы определили правильную длину колонки, объем ввода и скорость потока, мы можем найти эквивалентное время, необходимое для градиентного или ступенчатого элюирования. По мере уменьшения масштаба аналитического метода временная программа также должна быть уменьшена, чтобы фазовые взаимодействия оставались прежними. Время можно отрегулировать с помощью уравнения 4 .

Ссылка на статью: Рик Лейк, Restek Corporation

Solvent viscosity

Зависимость вязкости от состава смеси растворителей

% воды	Вязкость (МеОН/вода)	Вязкость (AcCN/вода)
0	0,65	0,35
10	0,95	0,50
20	1,20	0,55
30	1,60	0,70
40	1,75	0,80
50	1,90	0,90
60	1,80	1,00
70	1,75	1,05
80	1,65	1.10
90	1,40	1,05
100	1,00	1,00

Chromatography tables

Выбор капилляров для различных скоростей потока

Выбор колонки в зависимости от объема впрыска и ее производительности

Подвижная фаза aditivum УФ-отсечка

pK _a кислых буферов при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы

pK _b оснований при ВЭЖХ для приготовления подвижной фазы

Преобразование давления

Оценка давления в зависимости от размера частиц, диаметра и длины колонки

Вязкость смесей растворителей

Характеристики растворителя

Carbotrap X

Параметр	Характеристики
Прочность/тип сорбента	средний/сильный технический углерод
Удельная площадь поверхности	ок. 240 м ² /г
прибл. диапазон летучести аналита	от nC _3/4 до nC _6/7 (температура кипения от 50 до 150°C)
Примеры аналитов	легкие углеводороды, 1,3-бутадиен, бензол (для 2-недельной выдержки)
Максимальная температура сорбента	> 400°С
Рекомендуемая температура кондиционирования	от 350 до 400°С
Рекомендуемая температура десорбции	от 350 до 400 °C (но, по возможности, ниже температуры кондиционирования)

Дальнейшая информация

гидрофобный
минимальные присущие артефакты (<0,1 нг)
некоторая активность из-за следов металлов в древесноугольном сырье, используемом для производства сорбентов
рыхлый - склонен к образованию мелких частиц при механическом ударе. Избегайте попадания пробирок, содержащих эти сорбенты.
сжимаемый - чрезмерное уплотнение может привести к высокому импедансу и отрицательно повлиять на потоки отбора проб насосом
нельзя превышать максимальную температуру сорбента, так как сорбент разрушается и испаряется, что может привести к загрязнению вашего проточного тракта.
40/60 меш — рекомендуемый размер меш для сорбирующих трубок и ловушек.
рекомендуется повторно упаковывать трубки после 200 термоциклов

Carbopack X

Параметр	Характеристики
Прочность/тип сорбента	средний/сильный технический углерод
Удельная площадь поверхности	ок. 240 м ² /г
прибл. диапазон летучести аналита	от nC _3/4 до nC _6/7 (температура кипения от 50 до 150°C)
Примеры аналитов	легкие углеводороды, 1,3-бутадиен, бензол (для 2-недельной выдержки)
Максимальная температура сорбента	> 400°С
Рекомендуемая температура кондиционирования	от 350 до 400°С
Рекомендуемая температура десорбции	от 350 до 400 °C (но, по возможности, ниже температуры кондиционирования)

Дальнейшая информация

гидрофобный
минимальные присущие артефакты (<0,1 нг)
некоторая активность из-за следов металлов в древесноугольном сырье, используемом для производства сорбентов
рыхлый - склонен к образованию мелких частиц при механическом ударе. Избегайте попадания пробирок, содержащих эти сорбенты.
сжимаемый - чрезмерное уплотнение может привести к высокому импедансу и отрицательно повлиять на потоки отбора проб насосом
нельзя превышать максимальную температуру сорбента, так как сорбент разрушается и испаряется, что может привести к загрязнению вашего проточного тракта.
40/60 меш — рекомендуемый размер меш для сорбирующих трубок и ловушек.
рекомендуется повторно упаковывать трубки после 200 термоциклов

Tenax GR

Параметр	Характеристики
Прочность/тип сорбента	слабый пористый полимер
Удельная площадь поверхности	ок. 35 м ² /г
прибл. диапазон летучести аналита	nC ₇ до nC ₃₀ (от 100 до 450°C)
Примеры аналитов	ароматические соединения (кроме бензола), неполярные компоненты с т.кип. >100°С, полярные компоненты с т.кип. >150°С, ПАУ, ПХБ
Максимальная температура сорбента	> 350°С
Рекомендуемая температура кондиционирования	до 325°С
Рекомендуемая температура десорбции	до 300°С

Дальнейшая информация

гидрофобный
низкие собственные артефакты (<1 нг)
инертный - подходит для лабильных соединений
Tenax GR (графитированная форма) лучше всего подходит для ПАУ и ПХБ.
эффективная десорбция
нельзя превышать максимальную температуру сорбента, так как сорбент разрушается и испаряется, что может привести к загрязнению вашего проточного тракта.
35/60 меш — рекомендуемый размер меш для сорбирующих трубок и ловушек.
рекомендуется повторно упаковывать пробирки после 100 термоциклов