УВЭЖХ в деталях

UHPLC

Ультра-высокоэффективной жидкостной хроматографии является важным этапом в развитии жидкостной хроматографии. Он использует хроматографическую колонку с частицами <2 мкм, которые используются в аналитических приборов, способных работать при высоких давлениях. Это обеспечивает крайне быстрое разделение с высокой эффективностью. UHPLC является очень эффективным хроматографический метод, который предлагает работу с широким диапазоном скоростей потока и значительно сокращает время проведения анализа.

• измерительные приборы
• UHPLC колонны
• Приложения и поддержка
• Достижение UHPLC производительности на любом инструменте LC
• реагенты

Влияют на эффективность

С уменьшением размера частиц и повышения эффективности разделения (см диаграмму ниже). С меньшим диаметром частиц значительно увеличивая давление в колонне. Это приводит к очень высоким давлением при более длинных колонок LC. Это означает, что стандартные системы LC не может использовать колонку с частицами 1,9 мкм и той же длины, которые являются обычной колонке 5 мкм HPLC (например, 250 мм). Таким образом, они имеют более низкую колонку UHPLC или аналогичную эффективность в стандартной колонки ВЭЖХ. Что отличает UHPLC столбцы от стандарта, это значительно быстрее, время анализа, но не эффективность.

Если необходимо повысить эффективность сепарации, необходимо сначала выбрать подходящую неподвижную фазу , селективность для требуемого разделения будет самым высоким.

Applications and support in UHPLC

Уменьшение масштаба (перенос метода с традиционной ВЭЖХ на УВЭЖХ)

Пропускная способность пробы (Как мелкие частицы увеличивают пропускную способность пробы?)

Scale down in UHPLC

Процедура уменьшения масштаба от обычной ВЭЖХ до УВЭЖХ требует оптимизации селективности и эффективности колонок. Как только мы закончим разработку этого метода, мы можем выполнить процедуру масштабирования. Для определения эквивалентных условий запуска можно использовать несколько простых расчетов . В этой статье они описаны последовательно.

Настройка размера столбца

Первый расчет определяет соответствующую длину столбца. Сохранение той же длины колонки при уменьшении размера частиц увеличит количество теоретических тарелок в данной длине колонки. Следовательно, длину столбца можно сократить без потери разрешения. Используя уравнение 1 и правильно регулируя длину столбца, мы можем сохранить такое же разделение.

Регулировка объема инъекции

Как только мы определили правильную длину колонки, мы можем определить соответствующий объем инъекции. Уменьшение внутреннего диаметра и длины колонки уменьшает общий объем колонки и вместимость пробы. Таким образом, мы должны изменить объем впрыска, как описано в уравнении 2 . Обратите внимание, что, поскольку общий объем колонки уменьшился, важно, чтобы растворитель пробы соответствовал исходному составу подвижной фазы. Несоответствие растворителей образца может привести к невоспроизводимым временам удерживания, эффективности и даже изменениям в селективности.

Регулировка расхода

Скорость потока должна быть отрегулирована для поддержания сравнимой линейной скорости через колонку с меньшим внутренним диаметром. Линейная скорость определяется как расстояние, которое проходит подвижная фаза во времени, тогда как скорость потока представляет собой объем подвижной фазы, который проходит во времени. Для поддержания той же линейной скорости, которая важна для поддержания эффективности, скорость потока должна уменьшаться по мере уменьшения внутреннего диаметра колонки. Кроме того, поскольку меньшие размеры частиц приводят к более высоким оптимальным линейным скоростям, изократические скорости потока следует рассчитывать с учетом размера частиц. Уравнение 3 можно использовать для простой и быстрой оценки скорректированной скорости потока, необходимой для эквивалентной хроматографии. Также важно отметить, что более высокие скорости потока меньше влияют на размер частиц <2 мкм, поэтому более высокие скорости потока можно использовать в изократических системах без отрицательного влияния на пиковую эффективность.

Настройка временной программы

Наконец, после того как мы определили правильную длину колонки, объем ввода и скорость потока, мы можем найти эквивалентное время, необходимое для градиентного или ступенчатого элюирования. По мере уменьшения масштаба аналитического метода временная программа также должна быть уменьшена, чтобы фазовые взаимодействия оставались прежними. Время можно отрегулировать с помощью уравнения 4 .

Ссылка на статью: Рик Лейк, Restek Corporation