Chromatografia

Często zadawane pytania dotyczące MetAmino

Jaki jest rodzaj membrany wewnątrz filtra wirowego?

• Membrana wykonana jest z materiału NYLON, a jej porowatość wynosi 0,22 µm. Jego średnica jest zoptymalizowana do użytku z danym filtrem obrotowym.

Czy istnieje możliwość rozbudowy zestawu ^MetAmino® o inne anality?

• Tak, zestaw MetAmino ^® można dalej rozbudowywać. Skontaktuj się z nami w celu uzyskania szczegółowych informacji.

Czy mogę używać zestawu MetAmino ^® do badania moczu?

• Tak, zestaw MetAmino ^® może być używany do analizy moczu. Próbka nie może zawierać białek, dlatego przed użyciem zestawu należy ją potraktować w zwykły sposób (wirowanie, filtracja).

Czy możemy zamówić odczynniki osobno?

• Tak, cały zestaw odczynników można zamówić pod numerem katalogowym MAK-5857-L002 .

Jakie jest ciśnienie podczas analizy LC/MS?

• Na początku analizy ciśnienie wynosi 380 barów, na końcu 200 barów.

Czy MRM dla aminokwasów wymienionych w zestawie MetAmino ^® są generowane po czy przed derywatyzacją standardów?

• Przejścia MRM dla AA wymienione w podręczniku są wymienione jako przejścia pochodnych AA, a nie natywne AA.

Czy próbkę paszy należy poddać hydrolizie przed użyciem zestawu MetAmino ^® ?

• Wytrącanie przy użyciu ośrodka wytrącającego (PM) nie jest niezbędnym krokiem do udanej derywatyzacji próbki. Zestaw został przetestowany przede wszystkim pod kątem analizy biopłynów, które często zawierają peptydy. Aby zapobiec ich wytrącaniu podczas derywatyzacji, w protokole przygotowania próbki uwzględniono etap wytrącania.
• Jeśli wymagana jest całkowita analiza wolnych i związanych z peptydami aminokwasów, w takim przypadku zalecamy zhydrolizowanie próbki, a następnie wysuszenie części zhydrolizowanej próbki w strumieniu azotu lub w speedvacu. Rozpuść wysuszoną pozostałość w 25 µl dejonizowanej wody lub 0,1 M wodnym roztworze HCl (dla lepszej rozpuszczalności) i postępuj zgodnie z zaleceniami, dodając 10 µl roztworu IS.
• Jeśli chodzi o hydrolizę peptydów, stosowane dodatki (fenol, tiodiglikol) w pożywce do hydrolizy mogą być również derywatyzowane (prawdopodobnie niewidoczne w „ pełnym skanie ”). Dlatego jako medium do hydrolizy zalecamy 6M HCl.

Czy możemy zamówić zestaw MetAmino ^® GC/MS do przygotowania 400 próbek?

• Jeszcze nie, aktualnie posiadamy tylko zestaw MetAmino ^® GC/MS do przygotowania 100 próbek. Zestaw ten można zamówić pod numerem katalogowym MAK-5857-BA01.

W tabeli znajduje się 78 aminokwasów, z których część nie znajduje się w dostępnych standardowych mieszankach - więc czy powinniśmy polegać na przejściach MRM i patrzeć na czas retencji, czy też są to standardy, które powinniśmy kupić, jeśli chcemy je oznaczyć?

• Dla celów ilościowych zestaw MetAmino zawiera - jedna fiolka roztworu wzorcowego SD1 zawarta w zestawie zawiera 33 aminokwasy: AAA, ABA, ALA, APA, ARG, ASP, BAIBA, CC, CIT, CTH, GABA, GLU, GLY , GPR , HIS, HLY , HYP, ILE, LEU, LYS, MET, 1MHIS, 3MHIS, ORN, PHE, PHP, PRO, SAR, SER, THR, TPR, TYR, VAL i SD2 fiolka z liofilizowaną mieszaniną 3 aminokwasów : ASN, GLN, TRP. Jednak zestaw aminokwasów można dalej rozszerzyć na inne związki zawierające pierwszorzędowe lub drugorzędowe aminowe grupy funkcyjne.
• Masy (m/z) podane w instrukcji są prawidłowe i reprezentują jony M+H+. Masy (m/z) i czasy retencji z instrukcji uzyskano z instrumentu liniowej pułapki jonowej LTQ, ale dane z Certyfikatu Analizy uzyskano z instrumentu Q Exactive plus HRMS. W obu przypadkach zastosowano tę samą kolumnę, natężenie przepływu i skład fazy ruchomej. Czasy retencji (RT) są wartościami doświadczalnymi, a rozbieżności, szczególnie w przypadku późno eluujących związków, byłyby spowodowane użyciem różnych przyrządów LC/MS.

Instalacja kapilarnych kolumn GC

Krótka procedura instalowania kapilarnych kolumn GC

• Ochłodzić wszystkie ogrzewane strefy GC
• Sprawdź środki do czyszczenia gazu i wymień w razie potrzeby
• oczyścić wtryskiwacz i detektor
• Wymień wkładkę wtryskiwacza / detektora na nową
• Wymień ważne uszczelki w inżektorze i detektorze
• Wymień przegrodę we wtryskiwaczu
• Ustaw przepływ gazów detektora
• Dokładnie sprawdź kolumnę, jeśli nie jest uszkodzona
• Przymocuj nakrętkę i skuwkę do każdego końca kolumny
• Cięcie 10 centymetrów z każdego końca kolumny. Do wycinania kolumn kwarcowych użyj szafirowego noża lub płyty ceramicznej. Do wycinania metalowych kolumn użyj płytki ceramicznej lub kwadratowego pilnika. Narzędzia do cięcia kolumn można znaleźć w naszym katalogu.
• Zawieś kolumnę kapilarną na uchwytach termostatu GC, aby uniknąć uszkodzenia
• Włóż żądany koniec kolumny do wtryskiwacza. Aby uzyskać prawidłową długość, należy zapoznać się z instrukcją obsługi GC.
• Zamontuj kolumnę tak, aby nie dotykała ścianek termostatu
• Ustaw natężenie przepływu według kolumny zgodnie z parametrami podanymi na chromatogramie testowym producenta
• Ustaw współczynnik podziału, płukanie przegrody i inne parametry zgodnie z wymaganiami producenta GC
• Upewnić się, że gaz nośny przepływa przez kolumnę. Zanurz wolny koniec kolumny w fiolce z rozpuszczalnikiem (aceton lub izopropanol).
• Włóż pożądany koniec kolumny do wykrywacza. Aby uzyskać prawidłową długość, należy zapoznać się z instrukcją obsługi GC.
• Sprawdzić szczelność kolumny za pomocą czujnika przewodnictwa cieplnego. Nie należy używać wody z mydłem ani wykrywaczy nieszczelności, ponieważ kolumna może ulec uszkodzeniu.
• Ustaw temperaturę wtryskiwacza i czujkę. Włącz wykrywacz po stabilizacji. Uwaga - Należy uważać, aby nie przekroczyć maksymalnej dozwolonej temperatury kolumny!
• Teraz ustaw prawidłową objętość martwą (prędkość liniową), rozpylając metan lub inny związeknie jest zatrzymywany przez kolumnę.
• Sprawdź kształt piku, który powinien być symetryczny
• Koncentrować kolumnę w maksymalnej temperaturze do momentu ustabilizowania linii bazowej detektora (maksymalna temperatura zastosowana w kolumnie z chromatogramem).
• Ustaw temperaturę termostatu i ponownie wstrzyknij metan lub inny, związek nie zatrzymany przez kolumnę. Dostosuj warunki dla optymalnej prędkości liniowej.
• Wstrzyknąć zduplikowaną mieszaninę testową kolumny i sprawdzić stan kolumny i całego układu chromatograficznego
• Skalibruj instrument, a teraz możesz pobierać próbki

Uwaga: Jeśli nowa kolumna, należy wykonać klimatyzację przed ustawieniem optymalnego czasu martwego.

Kondycjonowanie kolumn GC

Kondycjonowanie kolumn chromatograficznych w podwyższonej temperaturze bez przepływającego gazu nośnego trwale uszkadza kolumnę. W przypadku wycieku tlen przenika do kolumny i, jeśli jest kondycjonowany w wyższych temperaturach, trwale ją uszkodzi. Dlatego przed kondycjonowaniem:

• sprawdź prawidłowe ustawienie natężenia przepływu przez kolumnę
• przeprowadzić kontrolę ciasta, aby uniknąć obecności tlenu w układzie chromatograficznym

Kondycjonowanie kolonii GC:

• zainstalować kolumnę w wtryskiwaczu. Nie podłączaj kolumny do wykrywacza (zostaw jej koniec w termostacie.
• ustawić początkową temperaturę termostatu GC na 40 ° C
• utrzymuj tę temperaturę przez 15 minut
• ustawić gradient temperatury na 10 ° C / min
• ustawić maksymalną temperaturę o 20 ° C powyżej maksymalnej wartości programu temperaturowego, w którym pracujesz (maksymalna temperatura musi być o 25 ° C niższa niż maksymalna dopuszczalna temperatura kolumny GC) *
• pozostawić kolumnę w wysokiej temperaturze przez noc i do momentu ustabilizowania linii bazowej wykrywacza. Jeśli kolumna jest wstępnie kondycjonowana, pozostaw ją w maksymalnej temperaturze przez 2 godziny i do momentu ustabilizowania linii bazowej wykrywacza.

^* Uwaga: W przypadku wstępnie kondycjonowanych kolumn nie jest konieczne stosowanie warunkowania przez noc. Uważnie przeczytaj instrukcje dostarczone z Kolumną, które mają pierwszeństwo przed ogólnymi zaleceniami powyżej.

EasyFlash kolumny

Chromservis wprowadził nowe kolumny EasyFlash do wysoko wydajnej chromatografii flash. W tym artykule dowiesz się o zaletach chromatografii flash.

Połączenia HPLC (TN #539)

Niniejsza uwaga techniczna przedstawia możliwe rodzaje połączeń pomiędzy kolumną a systemem LC. Złe połączenie może mieć wpływ na separację szczytów i należy go unikać. Poniżej przedstawiono prawidłowe połączenie .

Jak działa potrójna kwadrupola?

Zasada potrójnej kwadrupolu (TQ) została wyjaśniona w systemie EVOQ ™ firmy Bruker . Kluczowymi elementami systemu są:

• Osiowe intuicyjne źródło
• Aktywne skupienie jonów w Q1
• Droga jonowa bez optyki jonowej
• Kolumna zderzeniowa o geometrii 180 °
• Projekt eliptyczny
• Detektor zlokalizowany poza osią Q3

puriFlash

Błyskowe kolumny puriFlash ^®

Firma Interchim opracowała nową technologię Ultra Performance Flash Purification (UPFP) , wykorzystującą specjalne pudełka flash, które wykorzystują zwykły lub nieregularny żel krzemionkowy. UPFP umożliwia oczyszczanie związków w celu uzyskania wysokiej czystości i mniejszego zużycia rozpuszczalnika.

Preparatywna LC

Zadania systemów preparatywnej i analitycznej HPLC różnią się od siebie. O ile zadaniem analitycznej HPLC jest jakościowe i ilościowe oznaczenie określonych związków w próbkach, o tyle zadaniem preparatywnej HPLC jest wydzielenie, oczyszczenie i izolacja wartościowych produktów z mieszanin.

Chromatografię preparatywną można podzielić na trzy podstawowe obszary:

• Chromatografia błyskawiczna
• Separacja półpreparacyjna
• Preparatywna chromatografia okresowa (półoperacyjna lub produkcyjna)
• „Prawdziwa chromatografia przeciwprądowa”
• „ Symulowane ruchome łóżko ” (SMB)
• Chromatografia ciągła

Definicji zakresu

Chromatografię preparatywną można połączyć z chromatografią Flash w jednym systemie – chromatografie oczyszczającym. System PuriFlash (Advion-Interchim) oferuje różne tryby pracy:

• Tryb przygotowawczy + tryb Flash
• Dwa tryby Flash
• Dwa tryby przygotowawcze

Wstęp

Aminokwasy są kluczowymi elementami budulcowymi życia i odgrywają kluczową rolę w różnych szlakach metabolicznych. Działają głównie jako półprodukty, często niezwiązane bezpośrednio z białkami. Ze względu na ich złożoność chemiczną i zakres dynamiczny, ich wiarygodna analiza ilościowa i jakościowa w płynach biologicznych i tkankach ma kluczowe znaczenie dla informacji o wartościach odżywczych, identyfikacji związków i diagnostyki.

W tym celu opracowano prostą, elegancką i jak dotąd najszybszą metodę analizy bezcennych aminokwasów. Zestaw Metamino® oparty na LC/GC-MS oferuje kompleksowe rozwiązanie aż do 75 metabolitów, w tym podstawowych aminokwasów proteinogennych, amin biogennych i koenzymów, z możliwością dalszego rozszerzenia analitu.

Cechy

• W zasadzie nadaje się do wszelkich matryc (mocz, surowica krwi, łza, płyn mózgowy, ekstrakty tkankowe, ekstrakty glebowe itp.)
• Łatwe przygotowanie próbki
• Derywatyzacja i analiza próbek w czasie krótszym niż 20 minut
• Szerokie portfolio analitów (75) z możliwością dalszej rozbudowy
• Nie ma potrzeby podgrzewania/zamrażania próbki
• Dostępna biblioteka NIST dla GC/MS
• Możliwość oznaczania substancji o niskiej masie cząsteczkowej, które mogą ulegać rozkładowi w źródle jonów (np. GLY, ALA itp.)
• Nadaje się do analizy substancji trudnych do określenia ilościowego, takich jak poliaminy
• W zestawie znajdują się wszystkie niezbędne odczynniki, akcesoria, kolumna HPLC i jasne instrukcje dotyczące derywatyzacji i analizy z dużą dokładnością i czułością