Rady a tipy

Připojení HPLC (TN #539)

Tato technická poznámka ukazuje možné typy spojení mezi sloupem a LC systémem. Špatné připojení může ovlivnit oddělení špiček a je třeba se mu vyhnout. Správné zapojení je uvedeno níže .

Přípustné úpravy metod HPLC

V této technické poznámce jsou uvedeny HPLC kolony Chromservis odpovídající USP metodám a rozsah, v jakém lze různé parametry chromatografického testu upravit bez zásadních změn lékopisných analytických postupů. Jiné než uvedené změny vyžadují revalidaci postupu.

JAK SPRÁVNĚ UZAVÍRAT KRIMPOVACÍ VIALKY

Krimpovací vialky jsou výbornou vzorkovnicí pro automatické dávkovače plynových a kapalinových chromatografů a pro skladování vzorků nebo kalibračních roztoků. Technika jejich uzavírání je velmi důležitá pro správnou těsnost. Díky netěsnosti způsobené nesprávným uzavřením, může dojít k odpaření rozpouštědla nebo ke ztrátě analytů.
Správně uzavřená vialka se pozná podle toho, že se její víčko po uzavření protáčí ztěžka a septum je rovné.
Vialka, která je uzavřená příliš velkou silou se pozná podle toho, že jejím víčkem nelze zpravidla vůbec otáčet a navíc má prohnuté septum (směrem dovnitř). Dojde-li k propíchnutí septa jehlou mikrostříkačky, dojde k velkému namáhání septa a tím k narušení těsnosti vialky.
Vialka, která nemá správně uzavřené víčko, díky malé síle krimpovacích kleští, se projevuje snadným otáčením víčka a v některých případech i neobepnutým hliníkovým materiálem kolem spodního okraje límce vialky.
Správnou sílu uzavíracích kleští můžete nastavit.
U starších typů kleští se nastavení síly provádí otáčením imbusového klíče uvnitř čelistí. Kleště mívají i dorazový šroub, kterým se nastavuje bezpečnostní vzdálenost, aby nedošlo k použití příliš vysoké síly a tím k netěsnosti nebo dokonce k mechanickému poškození vialky.

Závady a jejich odstranění

Většině problémů u GC a LC přístrojů lze předejít prováděním pravidelné preventivní údržby. Pokud hledáte příčinu chromatografického problému, vždy postupujte krok za krokem. Nikdy neprovádějte změnu více parametrů najednou, protože nebudete vědět, která ze změn měla vliv na výsledek chromatografické analýzy. .

Zde si můžete zvolit oblast chromatografie, ve které hledáte tipy pro odstranění závad:

GC troubleshooting

LC troubleshooting

Zvýšení poměru signál/šum v plynové chromatografii

Dnešní potřeby laboratoří jsou:

• nižší meze detekce a kvantifikace (LOD, LQD)
• zvýšení stability GC a GC/MS systémů
• vyšší inertnost a stabilita GC komponent (kolony, septa, vialky, linery, ...)

Nižší mez detekce a kvantifikace je možné dosáhnout:

• snížením šumu
• zvýšením signálu

Výběr vhodného septa pro GC

GC Agilent

GC DANI

GC Perkin-Elmer

GC Shimadzu

GC Varian

GC Thermo Scientific

Mikrostříkačky

Čištění mikrostříkaček a jejich údržba

Chromatografické stříkačky jsou velmi přesné a kvalitní dávkovače mikrolitrových množství kapalin. Přesto se jedná o výrobky, o které je potřeba se dobře starat. Tím zajistíte jejich dlouhou životnost a zkvalitníte dávkování vašich vzorků do chromatografů.

Některá rozpouštědla, jako např. halogenované uhlovodíky, mohou poškodit vysoce odolné lepidlo (cementované části) fixující jehlu k tělu mikrostříkačky. To může vést k zatuhnutí pístu nebo ucpání jehly.

Čištění skleněného těla stříkačky

Stříkačky Hamilton a SGE je nejlepší čistit rozpouštědlem se známou solvatační schopností, aby se nejlépe odstranily zbytky vzorků. Při čištění upřednostněte rozpouštědla neobsahující alkálické sloučeniny, fosfáty nebo detergenty. Hamilton nabízí čistící roztok schopný biodegradace (katalogové číslo 18311).

Stříkačku (vnitřní prostor skleněného těla) opláchněte nejprve deionizovanou vodou, acetonem nebo jiným rozpouštědlem rozpustným ve vodě (např. metanolem). Následně opláchněte stříkačku hexanem a vysušte. Vyvarujte se dlouhodobého ponoření stříkačky v čistícím roztoku.

Stříkačky MICROLITER™ (řada 600, 700, 800 a 900)

• Opláchněte stříkačku rozpouštědlem, které nejlépe rozpouští rezidua vzorku.
• Vyjměte píst z těla stříkačky a jemně ho otřete hadříkem, který neuvolňuje vlákna (ideální je hadřík namočený ve zvoleném rozpouštědle). vložte píst zpět do těla stříkačky a nasajte/vypusťte několikrát za sebou deionizovanou vodu. Postup opakujte s acetonem nebo metanolem a nakonec hexanem nebo obdobným nepolárním rozpouštědlem.
• Stříkačku vysušte.
• Pracujete-li s roztoky solí, doporučujeme skladovat stříkačku s vytáhnutým pístem.

Stříkačky GASTIGHT® (řada 1000, 1700 a 1800)

• Opláchněte stříkačku rozpouštědlem, které nejlépe rozpouští rezidua vzorku.
• Vyjměte píst z těla stříkačky a jemně ho otřete hadříkem, který neuvolňuje vlákna (ideální je hadřík namočený ve zvoleném rozpouštědle). vložte píst zpět do těla stříkačky a nasajte/vypusťte několikrát za sebou deionizovanou vodu. Postup opakujte s acetonem nebo metanolem a nakonec hexanem nebo obdobným nepolárním rozpouštědlem.
• Stříkačku vysušte.
• Pracujete-li s roztoky solí, doporučujeme skladovat stříkačku s vytáhnutým pístem

Skladování stříkaček

Stříkačky doporučujeme skladovat v originálním obalu. Ten je dokonale chrání a navíc vám poskytuje informaci o typu stříkačky.

Termální desporce

V této sekci jsme pro Vás připravili informace důležité při práci s termální desorpcí. Jedná se o poměrně náročnou analytickou techniku, pře které Vám tyto informace usnadní práci. Pokud zde hledané informace nenajdete, kontaktujte naše specialisty.

Parametry sorbentů

Měření emisí materiálů

Skladování a transport sorpčních trubiček

Kolony ChromShell a rozpouštědla

Při používání HPLC kolon ChromShell^® je zapotřebí vzít v úvahu několik důležitých charakteristik, které mají organická rozpouštědla používaná v mobilní fázi. Viskozita je nejdůležitějším parametrem, protože rozpouštědla s vysokou viskozitou jsou příčinou zvýšení protitlaku v HPLC systému. Dalšími důležitými parametry jsou "UV cutoff", index polarity a cena. Rozpouštědla s vysokým parametrem "UV cutoff" zhoršují citlivost v UV/Vis detektorech a rozpouštědla s nízkou polaritou způsobují rychlejší eluci organických sloučenin a jsou hodně používána pro čištění nebo regeneraci kolon.

Acetonitril

je pravděpodobně nejlepší organické rozpouštědlo používané ve směsi s vodou jelikož poskytuje nejnižší protitlak v HPLC systémech. Současně má velmi nízký "UV cutoff" a tedy výbornou citlivost v UV/Vis detektorech. Největší nevýhodou je jeho cena, která se v poslední době výrazně zvýšila.

Metanol

je další velmi oblíbené rozpouštědlo, které má podobnou eluční sílu jako acetonitril, má relativně nízkou absorbanci v UV oblasti a je mnohem levnější než acetonitril. Hlavní nevýhodou metanolu při jeho používání s HPLC kolonami s malou velikostí částic je tvorba vyššího protitlaku, který může přesáhnout limit HPLC přístroje.

Aceton

je méně používané rozpouštědlo díky vysoké absorbanci v UV oblasti. Někdy se využívá při analýzách sloučenin absorbujících při vyšších vlnových délkách nebo ve spojení s jinými typy detektorů, např. MS.

Etanol

není běžně doporučován pro používání s HPLC. Ve směsi s vodou způsobuje vysoký protitlak.

Iso-, n-propanol

mají relativně silnou eluční sílu a jsou většinou používána pro čištění kolon při nízkých průtocích, protože také generují vysoký protitlak.

Tetrahydrofuran

má podobnou eluční sílu jako n-propanol, ale díky vyšší ceně je používán méně často.

Deaktivace skla

Deaktivace skla pomocí DMDCS

Dimetyldichlorsilan (DMDCS) reaguje s aktivními hydroxylovými skupinami přítomnými na povrchu skla a tím vytváří deaktivovanou plochu. Tento postup zajustí inertní skleněné nádobí určené především pro citlivé sloučeniny.

Postup

V průběhu deaktivace se vyvíjí chlorovodík (HCl). Proto je nutné provádět deaktivaci v digestoři.

• K deaktivaci použijte 5% roztok DMDCS v toluenu. Roztok můžete připravit rozpuštěním 20 ml DMDCS v 400 ml toluenu. Roztok uchovávejte v tmavé skleněné nádobě při laboratorní teplotě.
• Ponořte skleněné nádobé určené k deaktivaci do 5% roztoku DMDCS na dobu 15 až 30 minut.
• Opláchněte sklo dvakrát toluenem.
• Ponořte sklo do metanolu na dobu 15 minut.
• opláchněte sklo metanolem.
• Vysušte sklo čistým dusíkem (bez vlhkosti a uhlovodíků).