Chromatografie

MetAmino FAQ

Jaké rozpouštědlo mám použít pro ředení AA standardů?

Pro ředění AA standardů doporučujeme použít AASDM (Amino Acid Standard Dilution Medium), avška deionizovaná voda také vyhovuje. AASDM má jinou úlohu v MetAminuo kitu.

Jaký je typ membrány uvnitř spin filtru?

• Membrána je vyrobena z materiálu NYLON a její porozita je 0,22 µm. Její průměr je optimalizovaný pro použití s daným spin filtrem.

Je možné rozšířit MetAmino^® kit o další analyty?

• Ano, MetAmino^® kit je možné dále rozšiřovat. Kontaktujte nás s detailními informacemi.

Můžu použít MetAmino^® kit pro analýzu moči?

• Ano, MetAmino^® kit lze použít pro analýzu moči. Vzorek nesmí obsahovat bílkoviny, takže před použitím kitu musí být upraven běžným způsobem (odstřeďování, filtrace).

Můžeme objednat reagencie samostatně?

• Ano, celou soupravu reagencií je možné objednat pod katalogovým číslem MAK-5857-L002.

Jaký je tlak v průběhu LC/MS analýzy?

• Na začátku analýzy je tlak 380 barů, na konci je 200 barů.

Jsou MRM pro aminokyseliny uvedené v MetAmino^® kitu vytvořeny po derivatizaci standardů nebo před ní?

• Přechody MRM pro AA uvedené v návodu jsou uvedeny jako přechody derivátů AA a nikoli nativních AA.

Měl by být vzorek krmiva před prací se soupravou MetAmino^® kitu hydrolyzován?

• Precipitace pomocí precipitačního média (PM) není nezbytným krokem pro úspěšnou derivatizaci vzorku. Kit byl testován především pro analýzu biofluidů, které často obsahují peptidy. Aby se zabránilo jejich srážení během derivatizace, byl krok srážení zahrnut do protokolu přípravy vzorku.
• Pokud je vyžadována celková analýza volných a na peptid vázaných aminokyselin, v tomto případě bychom doporučili vzorek hydrolyzovat a poté alikvot hydrolyzovaného vzorku vysušit pod proudem dusíku nebo ve speedvacu. Vysušený zbytek rozpusťte ve 25 µl deionizované vody nebo 0,1M vodné HCl (pro lepší rozpustnost) a postupujte podle návodu přidáním 10 µl roztoku IS.
• Pokud jde o hydrolýzu peptidů, používaná aditiva (fenol, thiodiglykol) v hydrolyzačním médiu by také mohla být derivatizována (pravděpodobně nebudou vidět ve "full scan"). Proto jako hydrolyzační médium doporučujeme 6M HCl.

Můžeme si objednat MetAmino^® GC/MS kit pro přípravu 400 vzorků?

• Zatím ne, v současné době máme pouze MetAmino^® GC/MS kit pro přípravu 100 vzorků. Tuto soupravu lze objednat pod katalogovým číslem MAK-5857-BA01.

V tabulce je 78 aminokyselin, z nichž některé nejsou v dostupných mixech standardů – máme se tedy spoléhat na MRM přechody a dívat se na retenční čas nebo jsou to standardy, které bychom si měli koupit, pokud je chceme určovat?

• Pro účely kvantifikace obsahuje sada MetAmino - jedna lahvička standardního roztoku SD1 obsaženého v sadě obsahuje 33 aminokyselin: AAA, ABA, ALA, APA, ARG, ASP, BAIBA, CC, CIT, CTH, GABA, GLU, GLY, GPR , HIS, HLY, HYP, ILE, LEU, LYS, MET, 1MHIS, 3MHIS, ORN, PHE, PHP, PRO, SAR, SER, THR, TPR, TYR, VAL a lahvička SD2 s lyofilizovanou směsí 3 aminokyselin: ASN, GLN, TRP. Sada aminokyselin však může být dále rozšířena na další sloučeniny obsahující primární nebo sekundární amino funkční skupiny.
• Hmotnosti (m/z) uvedené v příručce jsou správné a představují ionty M+H+. Hmotnosti (m/z) a retenční časy z manuálu byly získány z přístroje LTQ s lineární iontovou pastí, avšak data z Certifikátu analýzy byla získána z přístroje Q Exactive plus HRMS. V obou případech byla použita stejná kolona, průtok a složení mobilní fáze. Retenční časy (RT) jsou experimentální hodnoty a nesrovnalosti, zejména u sloučenin s pozdní elucí, by byly způsobeny použitím různých LC/MS přístrojů.

Instalace kapilárních GC kolon

Stručný postup při instalaci kapilárních GC kolon

• Vychlaďte všechny vyhřívané zóny GC
• Zkontrolujte čističe plynů a v případě potřeby je vyměňte
• vyčistěte injektor a detektor
• Vyměňte liner v injektoru/detektoru za nový
• Vyměňte důležitá těsnění v injektoru a detektoru
• Vyměňte septum v injektoru
• Nastavte průtok detektorových plynů
• Pečlivě zkontrolujte kolonu, není-li poškozená
• Nasaďte na každém konci kolony matici a ferulku
• Uřízněte 10 centimetrů z každého konce kolony. K řezání křemenných kolon použijte safírový nůž nebo keramickou destičku. K řezání kovových kolon použijte buďto keramickou destičku nebo hranatý pilník. Nástroje pro řezání kolon najdete v našem katalogu.
• Zavěste kapilární kolonu na držáky v termostatu GC, aby nedošlo k jejímu poškození
• Vložte požadovaný konec kolony do injektoru. Správnou délku najdete v návodu pro obsluhu daného GC.
• Kolonu nainstalujte tak, aby se nedotýkala stěn termostatu
• Nastavte průtok kolonou v souladu s parametry uvedenými v testovacím chromatogramu výrobce
• Nastavte splitový poměr, oplach septa a další parametry v souladu s požadavky výrobce GC
• Ujistěte se, že kolonou protéká nosný plyn. Ponořte volný konec kolony do vialky s rozpouštědlem (aceton nebo isopropanol).
• Vložte požadovaný konec kolony do detektoru. Správnou délku najdete v návodu pro obsluhu daného GC.
• Zkontrolujte těsnost kolony tepelně vodivostním detektorem. Nepoužívejte mýdlovou vodu nebo kapalné detektory netěsností, protože může dojít k poškození kolony.
• Nastavte teplotu injektoru a detektoru. Detektor zapněte po jeho stabilizaci. Upozornění - dbejte na to, abyste nepřekročili maximální povolenou teplotu kolony!
• Nyní nastavte správný mrtvý objem (lineární rychlost) nastříknutím metanu nebo jiné sloučeniny, která není kolonou zadržována.
• Zkontrolujte tvar píku, který by měl být symetrický
• Zkondicionujte kolonu při maximální teplotě, až se stabilizuje základní linie detektoru (v testovacím chromatogramu kolony najdete maximální použitou teplotu).
• Nastavte teplotu termostatu a znovu nastříkněte metan nebo jinou, sloučeninu, která není kolonou zadržována. Upravte podmínky pro optimální lineární rychlost.
• Nastříkněte duplicitně testovací směs kolony a zjistěte, v jakém stavu se nachází kolona a celý chromatografický systém
• Nakalibrujte přístroj a nyní můžete nastřikovat vzorky

Poznámka: Je-li kolona nová, musíte provést její kondicionování dříve, než budete nastavovat optimální mrtvý čas.

Kondicionování GC kolon

Kondicionování chromatografických kolon za zvýšené teploty bez průtoku nosného plynu trvale poškodí kolonu. V případě netěsnosti dojde k průniku kyslíku do kolony a při kondicionování za vyšší teploty dojde k jejímu trvalému poškození. Proto před započetím kondicionování:

• zkontrolujte správné nastavení prltoku kolonou
• proveďte kontrolu těstnosti abyste se vyvarovali přítomnosti kyslíku v chromatografickém systému

Kondicionování GC kolony:

• nainstalujte kolonu do injektoru. Kolonu nepřipojujte k detektoru (její konec nechte zajištěný uvnitř termostatu.
• nastavte počáteční teplotu termostatu GC na 40°C
• držte tuto teplotu po dobu 15
• nastavte teplotní gradient na 10°C/min
• nastavte maximální teplotu o 20°C nad maximální hodnotu teplotního programu, se kterým budete pracovat (maximální teplota musí být o 25°C nižší než je maximální povolená teplota GC kolony)*
• ponechejte kolonu při vysoké teplotě přes noc a dokud se nestabilizuje základní linie detektoru. Je-li kolona před-kondicionovaná, ponechejte ji na maximální teplotě po dobu 2 hodin a dokud se nestabilizuje základní linie detektoru.

^*Poznámka: Kondicionování přes noc není nutné u před-kondicionovaných kolon. Pečlivě si prostudujte návod dodávaný s kolonou, který má přednost před obecnými doporučeními uvedenými výše.

EasyFlash kolony

Chromservis uvedl na trh nové kolony EasyFlash pro vysoce účinnou flash chromatografii. V tomto článku se dozvíte o výhodách flash chromatografie.

Připojení HPLC (TN #539)

Tato technická poznámka ukazuje možné typy spojení mezi sloupem a LC systémem. Špatné připojení může ovlivnit oddělení špiček a je třeba se mu vyhnout. Správné zapojení je uvedeno níže .

Jak pracuje trojitý kvadrupól?

Princip trojnásobného kvadrupólu (TQ) je vysvětlený na systému EVOQ™ firmy Bruker. Klíčové prvky systému jsou zde:

• Axiální intový zdroj
• Aktivní zaostření iontů v Q1
• Iontová dráha bez iontové optiky
• Kolizní cela s geometrií 180°
• Eliptický design
• Detektor umístěný mimo osu Q3

puriFlash

Flash kolony puriFlash^®

Interchim vyvinul novou techniku pro chromatografii - Ultra Performance Flash Purification (UPFP) využívající speciální flash kolonky, které využívají pravidelný nebo nepravidelný silikagel. UPFP umožňuje purifikovat sloučeniny při získání vysoké čistoty výtěžku a s menší spotřebou rozpouštědel.

Preparativní LC

Úlohy preparativních a analytických HPLC systémů se od sebe liší. Zatímco úkolem analytické HPLC je kvalitativní a kvantitativní stanovení definovaných sloučenin ve vzorcích, úkolem preparativní HPLC je separace, vyčištění a izolace cenných produktů ze směsí.

Preparativní chromatografii lze rozdělit do třech základních oblastí:

• Flash chromatografie
• Semi-preparativní separace
• Vsádková preparativní chromatografie (poloprovozní nebo výrobní)
• "True Counter-current chromatography"
• "Simulated moving bed" (SMB)
• Kontinuální chromatografie

Definice rozsahu

Preparativní chromatografii lze kombnovat s Flash chromatografií v jednom systému - purifikační chromatograf. Systém PuriFlash (Advion-Interchim) nabízí různé provozní režimy:

• Preparative mód + Flash mód
• Dva Flash módy
• Dva preparativní módy

Úvod

Aminokyseliny jsou klíčovými stavebními kameny života a hrají klíčovou roli v různých metabolických drahách. Vzhledem k jejich chemické složitosti a dynamickému rozsahu je jejich spolehlivá kvantitativní a kvalitativní analýza v biologických tekutinách a tkáních zásadní pro nutriční informace, identifikaci sloučenin a diagnostiku.

Za tímto účelem byla vyvinuta jednoduchá, elegantní a dosud nejrychlejší metoda pro analýzu aminokyselin. Kit MetAmino^® na bázi LC/GC-MS nabízí komplexní řešení pro 75 metabolitů včetně základních proteinogenních aminokyselin, biogenních aminů a koenzymů s možností dalšího rozšíření analytů.

Vlastnosti

• V zásadě vhodný pro jakékoli matrice (moč, krevní sérum, slzy, mozková tekutina, tkáňové extrakty, půdní extrakty atd.)
• Snadná příprava vzorku
• Derivatizace a analýza vzorků do 20 minut
• Široké portfolio analytů (75) s možností dalšího rozšíření
• Není potřeba žádné zahřívání/zmrazování vzorku
• K dispozici knihovna NIST pro GC/MS
• Lze určit látky s nízkou molekulovou hmotností, které mohou být degradovány v iontovém zdroji (např. GLY, ALA atd.)
• Vhodné pro analýzu obtížně kvantifikovatelných látek, jako jsou polyaminy
• Součástí jsou všechna potřebná činidla, příslušenství, HPLC kolona a návod pro derivatizaci a analýzu s vysokou přesností a citlivostí