Chromatografie

UV cutoff aditiv pro mobilní fázi

Přepočty jednotek a tabulky

On-line přepočty jednotek:

• Užitečné tabulky v chromatografii a online přepočty jednotek
• pK kyselin a zásad používaných jako aditivum pro mobilní fáze HPLC
• UV cutoff aditiv pro mobilní fázi
• Volba kolony v závislosti na velikosti nástřiku a její kapacitě
• Volba kapilár pro různé průtoky
• Odhad tlaku na kolonách v závislosti na velikosti částic, průměru a délce kolony
• Závislost viskozity směsi rozpouštědel na jejím procentuálním složení
• Přepočet jednotek velikosti částic
• Převod metody z porézní částice na ChromShell (PŘIPRAVUJEME)

Dávkovací čerpadla

Dávkovací čerpadla

Dávkovací čerpadla nacházejí uplatnění v mnoha aplikacích, a to jak v laboratořích, tak i v průmyslu. Často se zde setkáváme, že je potřeba dávkovat za speciálních podmínek:

• Dávkování za vysokého tlaku (reaktory, tlakové aparatury)
• Dávkování při vysokých teplotách
• Vstřikování vysoce reaktivních kapalin
• Dávkování viskózních kapalin

Pro všechny tyto aplikace je možné využít technologie dávkování, která se využívá v oblasti vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Jedná se o dvoupístová čerpadla AZURA (Knauer), která jsou vybavena safírovými písty, které zajišťují velmi přesné, plynulé a vysokotlaké dávkování. Čerpadla mohou pracovat s průtokem 0,01 až 1000 ml/min, při teplotách -10°C až +120°C a s viskózními médii do 1000 mPa.s.

Čerpadla mohou být upravena i tak, že je lze využívat například v prostředí s nebezpečím výbuchu nebo v uzavřených atmosférách.

Příkladem vysoké odolnosti čerpadel AZURA je použití při dávkování oxidu sírového při výrobě metansulfonové kyseliny (MSA), jejíž uplatnění je především v čistících prostředcích.

Materiály

Hlavy dávkovacích čerpadel se vyrábějí z různých materiálů:

• Keramika
• Hastelloy C-276
• Nerezová ocel
• Titan
• Kombinace nerezová ocel/titan

Informace o nabízených modelech najdete zde.

Linery TOPAZ

True Blue Performance

Topaz™ deaktivace:

• Patentovaná chemická deaktivace lineru plynnou fází
• Deaktivace vaty až v linerech
• Dostupné v populárních designech a v modré rozlišovací barvě
• Vysoká inertnost, nízká diskriminace aktivních analytů
• Symetrický tvar kyselých i bazických analytů
• Zvýšená správnost a opakovatelnost výsledku
• Snížení detekčních limitů

Mnoho chromatografických problémů, jako např. špatná odezva, chybějící nebo chvostující píky je způsobeno aktivitou v nástřikovém lineru. Tyto nepříznivé efekty ztěžují identifikaci a kvantifikaci především u stopových analýz. Navá řada linerů TOPAZ™ firmy Restek nabízí výjimečnou inertnost, zlepšený přenos analytu na chromatografickou kolonu a vyšší symetrii píků. Vysoká inertnost linerů TOPAZ™ je zajištěna unikátním procesem deaktivace, který zajišťuje pasivaci povrchu lineru i křemenné vaty uvnitř a má za následek minimální ovlivnění reaktivních analytů.

Některé typy deaktivací, jako např. bazická, jsou účinné pouze na vybranou skupinu sloučenin. Naproti tomu vyvážená technologie deaktivace linerů TOPAZ™ brání interakcím mnoha chemických sloučenin. typickou ukázkou vysoké inertnosti je rozklad Endrinu a DDT v injektoru, kdy linery TOPAZ™ mají pouze 4,8% rozkladu Endrinu a 1,3% rozkladu DDT. Ve srovnání s jinými technologiemi deaktivace se jedná o poloviční nebo dokonce třetinovou ztrátu analytu!

Výběr linerů podle používaného přístroje najdete zde.

puriFlash RP

Více o stacionární fázích Flash kolon

Zde najdete detailní informace k jednotlivým reverzním stacionárním fázím používaných pro Flash chromatografii.

Reverzní fáze

puriFlash® RP-AQ

60Å - 500 m²/g

15 & 30 μm

RP-alkyl, 6% uhlíku

End-capping: mixed

Stabilita pH: 2.0 až 7.5

Separace/purifikace silně nebo středně polárních molekul

puriFlash® C18-AQ

100Å - 300 m²/g

5, 10, 15 & 30 μm

C18 mono-functional, 14% uhlíku

End-capping: mixed

Stabilita pH: 2.0 až 7.5

Separace/purifikace středně polárních a nepolárních molekul

puriFlash® C18-HP

100Å - 300 m²/g

5, 10, 15, 30 & 50 μm

C18 mono-functional, 16,5% uhlíku

End-capping: one-step

Stabilita pH: 1.5 až 7.5

Vynikající volba pro rutinní purifikace

Uptisphere® Strategy™ C18-HQ

100Å - 425 m²/g

1.7, 2.2, 3, 5, 10, 15 μm

C18 mono-functional, 19% uhlíku

End-capping: multi-step

Stabilita pH: 1.0 až 10.0

Vhodná pro mnoho farmaceutických aplikací a rutinní metody

puriFlash® C18-XS

100Å - 300 m²/g

5, 10, 3, 15 & 30 μm

C18 mono-functional, 17% uhlíku

End-capping: multi-step

Stabilita pH: 1.0 až 10.0

Vynikající fáze pro kompletní separaci bazických molekul

K dispozici je daleko širší množství stacionárních fází. kontaktujte nás pro více informací ohledně purifikací v režimu Flash chromatografie.

Reagencie pro UHPLC

UHPLC přístroje vyžadují rozpouštědla a chemikálie mnohem vyšší čistoty, než rozpouštědla, která jsou v současné době na trhu. ULC/MS rozpouštědla, pufry a modifikátory (Biosolve) mají maximální čistotu, jakoutato instrumentace vyžaduje:

• velmi nízký posun UV signálu při gradientní eluci
• minimální obsah nečistot
• nejnižší pozadí (obsah iontů) v MS detektorech
• méně než 100 ppb alkalických kovů

Rozpouštědla pro ULC/MS jsou filtrována přes mikrofiltr 0,1 µm, mají odparek max. 1 ppm a jsou balena v inertní atmosféře, čímž je zajištěna jejich delší stabilita při skladování. Kromě standardního 2,5 l balení Biosolve nabízí i reagencie pro nano LC/MS:

• 500 ml balení acetonitrilu, metanolu a isopropanolu
• 1 l balení ultra-čisté vody
• 100 ml TFA

Další informace o dodávaných reagenciích si vyžádejte u našich zástupců nebo kanceláří.

Čištění injektoru

INJEKTOR

• Udává se, že příčinu 85-90% problémů při analýze lze najít v inletu. Proto nezapomínejte pravidelně vyměňovat veškerý spotřební materiál. Liner, septum i veškerá těsnění mají omezenou životnost!
• Někdy však výměna spotřebního materiálu ani zaříznutí kolony nestačí. Pak je nutné vyčistit přívod. Obecné pokyny naleznete níže, ale vždy se řiďte pokyny především svého výrobce!

Čištění

• Vstup zchlaďte. Teplota by neměla přesahovat 40°C.
• Vypněte průtok nosného plynu.
• Deinstalujte případný autosampler.
• Deinstalujte kolonu.
• Otevřete přívod, vyberte veškerý spotřební materiál.
• Pokud lze, je vhodnější odpojit splitovou větev pneumatického systému od inletu.
• Inlet nyní sestává pouze z kovové trubky, která může a nemusí být na konci zúžená.
• Existují různé nástroje, které lze použít k čištění (např. Restek). Pomocí takového kartáče a methylenchloridu a methanolu pohyby dolů a vyčistěte přívod.
• Pomocí pipety prostříkněte vstup rozpouštědlem (rozpouštědlo pod vstupem zachyťte do kádinky) a jednoznačně se, že ve vstupu nezůstaly žádné částice nečistoty.
• Pro odstranění zbytků vložte nahřejte přívod na cca 65 °C.
• Reinstalujte splitovou větev pneumatického systému, nainstalujte nový spotřební materiál.
• Zapněte průtok nosného plynu. Zkontrolujte těsnost.
• Před zvýšením teploty nechte přívod alespoň 10 minut proplachovat. Odstraňte zbytky kyslíku. Předčasným zvýšením teploty může dojít k aktivaci a znehodnocení nového spotřebního materiálu.

Čištění detektoru

FID

Výrazný šum, náhodné ghost píky, malá citlivost. To jsou typické znaky špinavého FID detektoru.

Nejčastější příčinou kontaminace FIDu je krvácení z kolony. Spálená stacionární fáze se může usazovat na povrchu trysky detektoru a způsobovat problémy. Na trysku se však napalují i další kontaminanty.

Je potřeba vyčistit Váš detektor?

Výše popsané problémy ovšem nemusejí být způsobeny jen kontaminací detektoru. Níže popsané kroky Vám pomohou vyloučit další potenciální příčiny.

Nosný plyn a krvácení stacionární fáze

Možný zdroj kontaminace lze najít nejen v samotném detektoru, ale i před ním. Krvácení stacionární fáze kolony, septa, kontaminovaný inlet, znečištěný nosný plyn... K vyloučení tohoto zdroje zaslepte vstup FIDu odpovídající záslepkou a zapněte FID. Pokud problémy ustanou, hledejte problém mimo detektor. Není potřeba vyměnit liner? Septum? Vyčistit inlet? V jakém stavu je kolona? Máte čistý nosný plyn? Nemáte v systému netěsnost?

Vodík a vzduch

I vodík a vzduch použité ve FIDu mohou být zdrojem kontaminace. Zpozorněte zejména pokud se problémy objevily po výměně tlakové lahve.

Také nesprávný průtok/tlak těchto dvou plynů může být zdrojem zvýšeného šumu, snížené citlivosti a problémů při zapalování FIDu. Zkontrolujte průtoky pomocí průtokoměru.

Elektrický systém

I elektrické rušení může vykazovat podobné symptomy jako špinavý FID. Může se jednat o vadu elektrometru, špatný kontakt či rušení dalšími přístroji v laboratoři.

Než začnete čistit

• Nezapomeňte odpojit napájecí kabel!
• Pamatujte, že detektor může být horký!
• Při rozebírání FIDu věnujte pozornost izolačním částem. Používejte pinzetu, ať na tyto části nepřenesete nečistoty z rukou, či rukavic. Pozor na možné poškrábání.
• Pamatujte, že někdy může být jednodušší trysku vyměnit než ji čistit. Platí to zejména v případě, že je tryska těžce kontaminována a prudce se zvyšuje riziko poškrábání trysky při čištění.

Čištění

• Vyjměte trysku z FIDu.
• Vložte ji do ultrazvukové lázně s vodou a detergentem a ultrazvukujte cca 5-10min.
• Pomocí příslušného nástroje nebo vhodného tenkého drátu pročistěte trysku. Buďte pozorní. Případné poškrábání může vést ke změně tvaru plamene, zvýšení šumu či ztrátě citlivosti.
• Trysku opět vložte do ultrazvukové lázně a ultrazvukujte dalších 5-10min. Od této chvíle už pro manipulaci s tryskou používejte pouze pinzetu.
• Propláchněte trysku čistou vodou.
• Propláchněte trysku malým množstvím metanolu.
• Profoukněte trysku proudem vzduchu nebo dusíku.
• Nechte trysku uschnout.
• Seskládejte FID. Věnujte pozornost dotahování. Při přetažení trysky může dojít k její deformaci!
• Po seskládání můžete připojit kolonu. Je vhodné vyhřát FID na teplotu o 10°C-40°C vyšší než je obvyklá provozní teplota detektoru. Pozor na maximální teplotní limit FIDu! Pozor na maximální operační teplotu kolony!

Jak udržet Váš detektor FIT

• Nová kolona krvácí nejvíce. Instalujte kolonu do inletu jako obvykle, detektorový konec však nechte volně v peci a kondicionujte kolonu. Po té nainstalujte kolonu do detektoru.
• Používejte kvalitní kolony s nízkým krvácením.
• Vlhkost a kyslík v nosném plynu poškozují stacionární fázi kolony a způsobují její krvácení. Požívejte vysoce čisté plyny, molekulová síta, trapy... Kontrolujte těsnost plynového okruhu.
• Používejte vhodná septa s nízkou krvácivostí a měňte je dostatečně často.

ECD

ECD je specifický a citlivý detektor. Nevhodným chováním však můžete prudce snižovat jeho životnost. Postupné zvyšování signálu je u tohoto detektoru normální. Pokud ale zvýšení nastane skokově nebo se přidá další ze symptomů-zhoršení šumu, snížení citlivosti, hledejte problém.

Čištění

• ECD obsahuje radioaktivní materiál, proto jsou nařízené pravidelné otěrové testy. Je zakázáno ho otvírat a jakkoliv do něj zasahovat.
• ECD lze čistit jedině termicky. Obecně čištění probíhá tak, že se ECD detektor vyhřeje na teplotu blízkou své maximální operační teplotě a nečistoty se vypálí. Před čištěním se ujistěte, že v systému nejsou netěsnosti. Navyšování teploty probíhá postupně. Sledujte signál. Zvyšujte teplotu o 10-20 °C, signál začne růst. Počkejte až se signál ustálí a začne klesat, pak můžete opět zvýšit teplotu. Po dosáhnutí požadované teploty, čekejte na pokles signálu k očekávaným hodnotám.
• Řiďte se návodem Vašeho výrobce, postup se může lišit.
• Pokud zahříváte detektor s instalovanou kolonou nepřekračujte maximální operační teplotu kolony, případně kolonu deinstalujte z detektoru a nahraďte záslepkou.

Neničte svůj detektor!

• Používejte kvalitní plyny, určené pro ECD.
• Používejte molekulová síta, trapy na dočištění plynů.
• Při potížích- zvýšení signálu, zhoršení šumu, snížení citlivosti apod. kontrolujte těsnost systému.
• Používejte kvalitní kolony a septa s nízkým krvácením.

Volba hrotu stříkačky

Volba hrotu stříkačky záleží na tom, pro jakou aplikaci chcete stříkačku použít. Níže uvedený obrázek vám pomůže s výběrem správného hrotu.

Technologie GC/MS TOF

Proč zvolit techniku Fast GC/MS?

Požadavky laboratoří neustále narůstají a jejich zájmem jsou především:

• rychlé analýzy (vyšší kapacita a tedy efektivita & nižší náklady na analýzu)
• nízké detekční limity (díky požadavkům nových metod)
• vysoká kvalita dat spojená s čím dál tím složitějšími matricemi

Multidimenzionální (komprehensivní) GC, tedy GCxGC/MS má obrovské výhody právě u komplexních vzorků, kde standardní kvadrupólové systémy selhávají jednak svou rychlostí, jednak i svým omezením v oblasti citlivosti v plném rozsahu m/z. Mnoho reálných vzorků v praci již prokázalo, že při kontrolních analýzách prostřednictvím GCxGC/MS v nich byly odhaleny další sloučeniny, které nebyli identifikovány a standardní GC/MS technika vedla k mylné interpretaci.

Popis GC/MS-TOF

TOF vs. kvadrupólový analyzátor