Chromatografie

Dynamický headspace

Metoda dynamický headspace (DHS) se využívá pro širokou řadu environmentálních aplikací. Největší její použití je při analýze těkavých organických látek (VOC) v pitné, podzemní, povrchové a odpadní vodě. Tyto matrice obsahují směs sloučenin různé polarity a těkavosti (chlorované uhlovodíky, aromatické uhlovodíky, kyslíkaté sloučeniny apod). Dynamický headspace se dále využívá pro tyto aplikace:

charakterizace koření, bylinek, potravin, mýdel a voňavek
stanovení reziduálních monomerů a VOC v polymerech
analýza zbytkových rozpouštědel v potravinářských obalech a farmaceutických produktech
ověřování "bio-potravin"
stopová analýza aktivních farmaceutických látek
analýza metabolitů v biologických kapalinách (aromatické uhlovodíky v moči, benzen v krvi)

Principle of dynamic headspace

Přepočty jednotek

Objem HPLC kapilár

ID (mm)	ID (inch)	µl/cm	µl/inch	ID (mm)	ID (inch)	µl/cm	µl/inch
0.050	0.002"	0.02	0.05	1.00	0.040"	7.85	20.59
0.064	0.0025"	0.03	0.08	1.40	0.055"	15.39	38.93
0.075	0.003"	0.04	0.12	1.52	0.060"	18.15	46.33
0.10	0.004"	0.08	0.21	1.59	0.062"	19.86	49.47
0.13	0.005"	0.13	0.32	1.65	0.065"	21.38	54.38
0.17	0.0067"	0.23	0.58	1.70	0.067"	22.70	57.78
0.18	0.007"	0.25	0.63	1.78	0.070"	24.88	63.06
0.25	0.010"	0.49	1.29	2.00	0.079"	31.42	80.32
0.38	0.015"	1.13	2.90	2.10	0.083"	34.64	88.66
0.50	0.020"	1.96	5.15	2.16	0.085"	36.64	92.99
0.75	0.030"	4.42	11.58	2.40	0.094"	45.24	113.72

UV cutoff aditiv pro mobilní fázi

Aditivum	UV cutoff (nm)
Kyselina octová, 1%	230
Octan amonný, 10 mM	205
Uhličitan amonný, 10 mM	190
Hydrogenfosforečnan amonný, 50 mM	205
CAPS 3-(cyklohexylamino)ethansulfonová kyselina, 0,1 %	215
EDTA, 1 mM	190
Kyselina chlorovodíková, 0,1 %	190
Hydrogenfosforečnan vápenatý, 10 mM	190
Hydrogenfosforečnan vápenatý, 10 mM	190
MES 2-(N-morfolino)ethansulfonová kyselina, pH 6,0, 10 mM	215
Octan sodný, 10 mM	205
Citrát sodný, 10 mM	225
Dodecylsulfát sodný, 10 mM	190
Formiát sodný, 10 mM	200
Natrium-hexansulfonová kyselina, 5 mM	225
TEA, (triethylamin), 1%	235
TFA (kyselina trifluoroctová), 0,1 %	190
Tetrabutylamonium dihydrogenfosfát, 5 mM	200
TRIS HCl (Tris(hydroxylmethyl)aminomethan), pH 7,0, 20 mM	202
TRIS HCl (Tris(hydroxylmethyl)aminomethan), pH 8,0, 20 mM	212

Přepočty jednotek a tabulky

On-line přepočty jednotek:

Dávkovací čerpadla

Dávkovací čerpadla nacházejí uplatnění v mnoha aplikacích, a to jak v laboratořích, tak i v průmyslu. Často se zde setkáváme, že je potřeba dávkovat za speciálních podmínek:

Dávkování za vysokého tlaku (reaktory, tlakové aparatury)
Dávkování při vysokých teplotách
Vstřikování vysoce reaktivních kapalin
Dávkování viskózních kapalin

Pump Head Pro všechny tyto aplikace je možné využít technologie dávkování, která se využívá v oblasti vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Jedná se o dvoupístová čerpadla AZURA (Knauer), která jsou vybavena safírovými písty, které zajišťují velmi přesné, plynulé a vysokotlaké dávkování. Čerpadla mohou pracovat s průtokem 0,01 až 1000 ml/min, při teplotách -10°C až +120°C a s viskózními médii do 1000 mPa.s.

Čerpadla mohou být upravena i tak, že je lze využívat například v prostředí s nebezpečím výbuchu nebo v uzavřených atmosférách.

Příkladem vysoké odolnosti čerpadel AZURA je použití při dávkování oxidu sírového při výrobě metansulfonové kyseliny (MSA), jejíž uplatnění je především v čistících prostředcích.

Materiály

Hlavy dávkovacích čerpadel se vyrábějí z různých materiálů:

Keramika
Hastelloy C-276
Nerezová ocel
Titan
Kombinace nerezová ocel/titan

Informace o nabízených modelech najdete zde.

Linery TOPAZ

True Blue Performance

Topaz™ deaktivace:

Patentovaná chemická deaktivace lineru plynnou fází
Deaktivace vaty až v linerech
Dostupné v populárních designech a v modré rozlišovací barvě
Vysoká inertnost, nízká diskriminace aktivních analytů
Symetrický tvar kyselých i bazických analytů
Zvýšená správnost a opakovatelnost výsledku
Snížení detekčních limitů

Mnoho chromatografických problémů, jako např. špatná odezva, chybějící nebo chvostující píky je způsobeno aktivitou v nástřikovém lineru. Tyto nepříznivé efekty ztěžují identifikaci a kvantifikaci především u stopových analýz. Navá řada linerů TOPAZ™ firmy Restek nabízí výjimečnou inertnost, zlepšený přenos analytu na chromatografickou kolonu a vyšší symetrii píků. Vysoká inertnost linerů TOPAZ™ je zajištěna unikátním procesem deaktivace, který zajišťuje pasivaci povrchu lineru i křemenné vaty uvnitř a má za následek minimální ovlivnění reaktivních analytů.

Některé typy deaktivací, jako např. bazická, jsou účinné pouze na vybranou skupinu sloučenin. Naproti tomu vyvážená technologie deaktivace linerů TOPAZ™ brání interakcím mnoha chemických sloučenin. typickou ukázkou vysoké inertnosti je rozklad Endrinu a DDT v injektoru, kdy linery TOPAZ™ mají pouze 4,8% rozkladu Endrinu a 1,3% rozkladu DDT. Ve srovnání s jinými technologiemi deaktivace se jedná o poloviční nebo dokonce třetinovou ztrátu analytu!

Výběr linerů podle používaného přístroje najdete zde.

puriFlash RP

Více o stacionární fázích Flash kolon

Zde najdete detailní informace k jednotlivým reverzním stacionárním fázím používaných pro Flash chromatografii.

Reverzní fáze

puriFlash® RP-AQ

60Å - 500 m²/g

15 & 30 μm

RP-alkyl, 6% uhlíku

End-capping: mixed

Stabilita pH: 2.0 až 7.5

Separace/purifikace silně nebo středně polárních molekul

puriFlash® C18-AQ

100Å - 300 m²/g

5, 10, 15 & 30 μm

C18 mono-functional, 14% uhlíku

End-capping: mixed

Stabilita pH: 2.0 až 7.5

Separace/purifikace středně polárních a nepolárních molekul

puriFlash® C18-HP

100Å - 300 m²/g

5, 10, 15, 30 & 50 μm

C18 mono-functional, 16,5% uhlíku

End-capping: one-step

Stabilita pH: 1.5 až 7.5

Vynikající volba pro rutinní purifikace

Uptisphere® Strategy™ C18-HQ

100Å - 425 m²/g

1.7, 2.2, 3, 5, 10, 15 μm

C18 mono-functional, 19% uhlíku

End-capping: multi-step

Stabilita pH: 1.0 až 10.0

Vhodná pro mnoho farmaceutických aplikací a rutinní metody

puriFlash® C18-XS

100Å - 300 m²/g

5, 10, 3, 15 & 30 μm

C18 mono-functional, 17% uhlíku

End-capping: multi-step

Stabilita pH: 1.0 až 10.0

Vynikající fáze pro kompletní separaci bazických molekul

K dispozici je daleko širší množství stacionárních fází. kontaktujte nás pro více informací ohledně purifikací v režimu Flash chromatografie.

Reagencie pro UHPLC

Rozpouštědla pro UHPLC UHPLC přístroje vyžadují rozpouštědla a chemikálie mnohem vyšší čistoty, než rozpouštědla, která jsou v současné době na trhu. ULC/MS rozpouštědla, pufry a modifikátory (Biosolve) mají maximální čistotu, jakoutato instrumentace vyžaduje:

velmi nízký posun UV signálu při gradientní eluci
minimální obsah nečistot
nejnižší pozadí (obsah iontů) v MS detektorech
méně než 100 ppb alkalických kovů

Rozpouštědla pro ULC/MS jsou filtrována přes mikrofiltr 0,1 µm, mají odparek max. 1 ppm a jsou balena v inertní atmosféře, čímž je zajištěna jejich delší stabilita při skladování. Kromě standardního 2,5 l balení Biosolve nabízí i reagencie pro nano LC/MS:

500 ml balení acetonitrilu, metanolu a isopropanolu
1 l balení ultra-čisté vody
100 ml TFA

Další informace o dodávaných reagenciích si vyžádejte u našich zástupců nebo kanceláří.

Čištění injektoru

INJEKTOR

Udává se, že příčinu 85-90% problémů při analýze lze najít v inletu. Proto nezapomínejte pravidelně vyměňovat veškerý spotřební materiál. Liner, septum i veškerá těsnění mají omezenou životnost!
Někdy však výměna spotřebního materiálu ani zaříznutí kolony nestačí. Pak je nutné vyčistit přívod. Obecné pokyny naleznete níže, ale vždy se řiďte pokyny především svého výrobce!

Čištění

Vstup zchlaďte. Teplota by neměla přesahovat 40°C.
Vypněte průtok nosného plynu.
Deinstalujte případný autosampler.
Deinstalujte kolonu.
Otevřete přívod, vyberte veškerý spotřební materiál.
Pokud lze, je vhodnější odpojit splitovou větev pneumatického systému od inletu.
Inlet nyní sestává pouze z kovové trubky, která může a nemusí být na konci zúžená.
Existují různé nástroje, které lze použít k čištění (např. Restek). Pomocí takového kartáče a methylenchloridu a methanolu pohyby dolů a vyčistěte přívod.
Pomocí pipety prostříkněte vstup rozpouštědlem (rozpouštědlo pod vstupem zachyťte do kádinky) a jednoznačně se, že ve vstupu nezůstaly žádné částice nečistoty.
Pro odstranění zbytků vložte nahřejte přívod na cca 65 °C.
Reinstalujte splitovou větev pneumatického systému, nainstalujte nový spotřební materiál.
Zapněte průtok nosného plynu. Zkontrolujte těsnost.
Před zvýšením teploty nechte přívod alespoň 10 minut proplachovat. Odstraňte zbytky kyslíku. Předčasným zvýšením teploty může dojít k aktivaci a znehodnocení nového spotřebního materiálu.

Čištění detektoru

FID

Výrazný šum, náhodné ghost píky, malá citlivost. To jsou typické znaky špinavého FID detektoru.

Nejčastější příčinou kontaminace FIDu je krvácení z kolony. Spálená stacionární fáze se může usazovat na povrchu trysky detektoru a způsobovat problémy. Na trysku se však napalují i další kontaminanty.

Je potřeba vyčistit Váš detektor?

Výše popsané problémy ovšem nemusejí být způsobeny jen kontaminací detektoru. Níže popsané kroky Vám pomohou vyloučit další potenciální příčiny.

Nosný plyn a krvácení stacionární fáze

Možný zdroj kontaminace lze najít nejen v samotném detektoru, ale i před ním. Krvácení stacionární fáze kolony, septa, kontaminovaný inlet, znečištěný nosný plyn... K vyloučení tohoto zdroje zaslepte vstup FIDu odpovídající záslepkou a zapněte FID. Pokud problémy ustanou, hledejte problém mimo detektor. Není potřeba vyměnit liner? Septum? Vyčistit inlet? V jakém stavu je kolona? Máte čistý nosný plyn? Nemáte v systému netěsnost?

Vodík a vzduch

I vodík a vzduch použité ve FIDu mohou být zdrojem kontaminace. Zpozorněte zejména pokud se problémy objevily po výměně tlakové lahve.

Také nesprávný průtok/tlak těchto dvou plynů může být zdrojem zvýšeného šumu, snížené citlivosti a problémů při zapalování FIDu. Zkontrolujte průtoky pomocí průtokoměru.

Elektrický systém

I elektrické rušení může vykazovat podobné symptomy jako špinavý FID. Může se jednat o vadu elektrometru, špatný kontakt či rušení dalšími přístroji v laboratoři.

Než začnete čistit

Nezapomeňte odpojit napájecí kabel!
Pamatujte, že detektor může být horký!
Při rozebírání FIDu věnujte pozornost izolačním částem. Používejte pinzetu, ať na tyto části nepřenesete nečistoty z rukou, či rukavic. Pozor na možné poškrábání.
Pamatujte, že někdy může být jednodušší trysku vyměnit než ji čistit. Platí to zejména v případě, že je tryska těžce kontaminována a prudce se zvyšuje riziko poškrábání trysky při čištění.

Čištění

Vyjměte trysku z FIDu.
Vložte ji do ultrazvukové lázně s vodou a detergentem a ultrazvukujte cca 5-10min.
Pomocí příslušného nástroje nebo vhodného tenkého drátu pročistěte trysku. Buďte pozorní. Případné poškrábání může vést ke změně tvaru plamene, zvýšení šumu či ztrátě citlivosti.
Trysku opět vložte do ultrazvukové lázně a ultrazvukujte dalších 5-10min. Od této chvíle už pro manipulaci s tryskou používejte pouze pinzetu.
Propláchněte trysku čistou vodou.
Propláchněte trysku malým množstvím metanolu.
Profoukněte trysku proudem vzduchu nebo dusíku.
Nechte trysku uschnout.
Seskládejte FID. Věnujte pozornost dotahování. Při přetažení trysky může dojít k její deformaci!
Po seskládání můžete připojit kolonu. Je vhodné vyhřát FID na teplotu o 10°C-40°C vyšší než je obvyklá provozní teplota detektoru. Pozor na maximální teplotní limit FIDu! Pozor na maximální operační teplotu kolony!

Jak udržet Váš detektor FIT

Nová kolona krvácí nejvíce. Instalujte kolonu do inletu jako obvykle, detektorový konec však nechte volně v peci a kondicionujte kolonu. Po té nainstalujte kolonu do detektoru.
Používejte kvalitní kolony s nízkým krvácením.
Vlhkost a kyslík v nosném plynu poškozují stacionární fázi kolony a způsobují její krvácení. Požívejte vysoce čisté plyny, molekulová síta, trapy... Kontrolujte těsnost plynového okruhu.
Používejte vhodná septa s nízkou krvácivostí a měňte je dostatečně často.

ECD

ECD je specifický a citlivý detektor. Nevhodným chováním však můžete prudce snižovat jeho životnost. Postupné zvyšování signálu je u tohoto detektoru normální. Pokud ale zvýšení nastane skokově nebo se přidá další ze symptomů-zhoršení šumu, snížení citlivosti, hledejte problém.

Čištění

ECD obsahuje radioaktivní materiál, proto jsou nařízené pravidelné otěrové testy. Je zakázáno ho otvírat a jakkoliv do něj zasahovat.
ECD lze čistit jedině termicky. Obecně čištění probíhá tak, že se ECD detektor vyhřeje na teplotu blízkou své maximální operační teplotě a nečistoty se vypálí. Před čištěním se ujistěte, že v systému nejsou netěsnosti. Navyšování teploty probíhá postupně. Sledujte signál. Zvyšujte teplotu o 10-20 °C, signál začne růst. Počkejte až se signál ustálí a začne klesat, pak můžete opět zvýšit teplotu. Po dosáhnutí požadované teploty, čekejte na pokles signálu k očekávaným hodnotám.
Řiďte se návodem Vašeho výrobce, postup se může lišit.
Pokud zahříváte detektor s instalovanou kolonou nepřekračujte maximální operační teplotu kolony, případně kolonu deinstalujte z detektoru a nahraďte záslepkou.

Neničte svůj detektor!

Používejte kvalitní plyny, určené pro ECD.
Používejte molekulová síta, trapy na dočištění plynů.
Při potížích- zvýšení signálu, zhoršení šumu, snížení citlivosti apod. kontrolujte těsnost systému.
Používejte kvalitní kolony a septa s nízkým krvácením.