Repromer Na HPLC kolumna, 9 μm, 300 × 8 mm

Chromservis wprowadził na rynek nową linię kolumn HPLC przeznaczonych do separacji cukrów, alkoholi cukrowych i kwasów organicznych. Na rynku istnieje wiele kolumn do analizy cukrów o różnej selektywności i zasadzie rozdziału. Istnieją cztery główne metody oddzielania cukrów, alkoholi cukrowych i kwasów organicznych.

Ważna informacja

Różnice w tych 4 typach kolumn dotyczą głównie kolejności elucji poszczególnych pików oraz trybów separacji i pierwiastków stosowanych w separacji. Istnieją dwie przydatne zasady:

• Kolumny Reprosil Carbohydrate, Repromer RCX i Reprosil-Pur C18-AQ – pierwsze związki eluujące to małe cząsteczki cukru, a następnie wyższe polisacharydy
• Reprogel a Repromer (H, Ca, K, Na, Pb) Kolumny polimerowe – pierwsze eluujące związki to przeciwnie polisacharydy.

Separacja cukrów prostych poprawia się na kolumnach Repromer z formy Na do Ca i do Pb. W przypadku oligosacharydów obowiązuje zasada odwrotna – rozdział poprawia się na kolumnach w kolejności: Pb, Ca i Na.

Tryby separacji:

1. Separacja na fazach na bazie żelu krzemionkowego z grupą aminową (USP L8) działa na kolumnie Reprosil Carbohydrate w temperaturach od 20 do 40 °C. Typową fazą ruchomą jest acetonitryl/woda (ok. 70/30). Stabilność kolumny mieści się w zakresie pH 3 i 7.
2. Separacja faz polimerowych sorbentem jonowymiennym działa na kolumnach Repromer (dawniej ReproGel), w których zastosowano sorbent w pełni sulfonowany kopolimer styren-diwinylobenzen usieciowany 8%-owym kationitem. Oto kilka form jonowych odpowiednich do separacji cukrów, alkoholi cukrowych i kwasów organicznych:

• Repromer H (USP L17) cukry, alkohole cukrowe, kwasy organiczne;
• Repromer Ca (USP L19) disacharydy, monosacharydy i alkohole cukrowe;
• Repromer Pb (USP L34) monosacharydy, próbki mleka z laktozą i laktulozą;
• mono- i oligosacharydy repromeru Na (USP L58);
• Repromer K .

Typową fazą ruchomą jest woda w wyższych temperaturach (60 do 90 °C) dla wszystkich faz lub 5mM kwas siarkowy (H2SO4) dla kolumny Repromer H w niższych temperaturach. Detekcja to RI lub UV (192–200 nm), ciśnienie poniżej 100 barów.

3. Rozdzielanie na polimerycznej anionowymiennej fazie styren-diwinylobenzen przy wyższym pH (USP L47) w trybie izokratycznym lub gradientowym z detekcją PAD (impulsowy detektor amperometryczny), CDD (detektor przewodności) lub RI.

• Repromer 10-RCX dla niższych cukrów i alkoholi cukrowych do DP8;
• Repromer 30 RCX dla wyższych cukrów do DP15.

Typową fazą ruchomą jest 10–100 mM wodorotlenek sodu (NaOH) lub octan sodu przy separacji gradientowej, przy ciśnieniu poniżej 100 bar.

4. Rozdzielanie na fazy na bazie żelu krzemionkowego z grupą C18 (USP L1) odbywa się na kolumnie Reprosil-Pur C18-AQ w temperaturach od 20 do 40 °C. Typową fazą ruchomą jest woda dla cukrów i 0,2M kwas triwodorofosforowy (H3PO4) dla kwasów organicznych, ciśnienie do 400 barów.