Repromer Ca HPLC kolóna, 9 μm, 300 × 8 mm

Firma Chromservis prináša na trh novú radu HPLC kolón na separáciu cukrov, cukorných alkoholov a organických kyselín. Na trhu je množstvo kolón na analýzu sacharidov s rôznou selektivitou a princípom separácie. Na separáciu cukrov, cukorných alkoholov a organických kyselín sú na výber 4 hlavné metódy.

Dôležité:

Rozdiely medzi týmito 4 typmi kolón sú hlavne v rozdielnom elučnom poradí jednotlivých píkov a separačných módoch a eluentoch použitých na separáciu. Existujú 2 užitočné pravidlá:

• pri kolónach Reprosil Carbohydrate, Repromer RCX a Reprosil-Pur C18-AQ eluujú ako prvé molekuly malých cukrov a za nimi väčšie polysacharidy
• pri polymérnych kolónach Reprogel a Repromer (H, Ca, K, Na, Pb) práve naopak, ako prvé euluujú polysacharidy.

Separácia monosacharidov sa zlepšuje na kolónach Repromer od Na k Ca a k Pb forme. Pre oligosacharidy platí presne opačné pravidlo, separácia sa zlepšuje na kolónach v poradí Pb, Ca a Na.

Separačné módy:

1. Separácia na silikagélových fázach s amino skupinou (USP L8) prebieha na kolóne Reprosil Carbohydrate pri teplotách medzi 20 až 40 °C. Typickou mobilnou fázou je acetonitril : voda (okolo 70/30). Stabilita kolóny je v rozsahu pH 3 až 7.
2. Separácia na polymérnych fázach s iónvýmenným sorbentom prebieha na kolónach Repromer (predtým ReproGel), ktoré obsahujú sorbent plne sulfónovaný styrén-divinylbenzénový kopolymér kroslinkovaný 8% silným katiónovým iónmeničom. Keďže je k dispozícii niekoľko iónových foriem, sú vhodné na separáciu cukrov, cukorných alkoholov a organických kyselín:

• Repromer H (USP L17) cukry, cukorné alkoholy, organické kyseliny;
• Repromer Ca (USP L19) disacharidy, monosacharidy a cukorné alkoholy;
• Repromer Pb (USP L34) monosacharidy, mliečne vzorky s laktózou a laktulózou;
• Repromer Na (USP L58) mono a oligosacharidy;
• Repromer K.

Typickou mobilnou fázou je voda pri vyšších teplotách (60 až 90 °C) pre všetky fázy alebo 5mM kyselina sírová (H2SO4) pri Repromer H a nižších teplotách. Detekcia RI alebo UV (192–200 nm), tlak pod 100 bar.

3. Separácia na polymérnych aniónvýmenných styrén-divinylbenzénových fázach pri vysokom pH (USP L47) v izokratickom alebo gradientovom móde s detekciou PAD (pulzný ampérometrický detektor), CDD (vodivostný detektor) alebo RI.

• Repromer 10-RCX pre malé cukry a cukroné alkoholy do DP8;
• Repromer 30 RCX pre vyššie cukry do DP15.

Typickou mobilnou fázou je 10–100mM hydroxid sodný (NaOH) alebo octan sodný pri gradientovej separácii, tlak pod 100 bar.

4. Separácia na silikagélových fázach s C18 skupinou (USP L1) prebieha na kolóne Reprosil-Pur C18-AQ pri teplotách medzi 20 až 40 °C. Typickou mobilnou fázou je voda pre cukry a 0,2M kyselina trihydrogénfos­forečná (H3PO4) pre organické kyseliny, tlak do 400 bar.